Jogos ácidos nucleicos hypodermal e hematopoietic infecciosos da detecção do vírus da necrose (IHHNV)
(Método PCR-fluorescente da ponta de prova)
Uso pretendido:
Este jogo é apropriado para a detecção específica de IHHNV em amostras de água, em plântulas do camarão, em isca, etc., e é usado para o diagnóstico etiological de pessoas contaminadas suspeitadas.
Princípio:
Este jogo é o fragmento específico subcutâneo e hematopoietic infeccioso escolhido à ponta de prova da ponta de prova das primeiras demão do projeto, a ponta de prova do vírus da necrose do órgão (IHHNV) com área da amplificação da primeira demão no meio de um molde obrigatório específico do ADN, em processo da extensão do PCR, as enzimas limitadas da polimerase de Taq do 5" extremidade de grupos fluorescentes na ponta de prova será reduzido, faz livre no sistema de reação, assim, o 3" - o grupo extinto extremidade foi separado e a fluorescência foi emitida, que foi detectada pelo instrumento do PCR da fluorescência para realizar a detecção do vírus subcutâneo e hematopoietic infeccioso da necrose (IHHNV) em um sistema de reação completamente fechado.
Componentes principais:
| Componente |
Especificação |
| Líquido da reação do PCR |
24 tubos |
| Controle positivo |
1 tubo |
| Controle negativo |
1 tubo |
Nota: os componentes em grupos diferentes de jogos não devem ser permutáveis.
Exigências da amostra:
1. Tipo da amostra
Plântulas: pai, ovos do camarão, plântulas, produtos padrão grosseiros
Lagoa: lama inferior, excremento, corpo da água
Isca: a isca viva, a isca refrigerada e a não-alto-temperatura trataram amostras da isca
2. Transporte
Prove a coleção e o transporte será realizado de acordo com NY/T 541. As amostras serão transportadas ao laboratório o mais cedo possível sob circunstâncias refrigeradas para evitar a gelo-aproximação amigável repetida.
3. Preservação da amostra
Pode ser armazenado por 24 horas em 2℃~8℃, e pode ser armazenado por muito tempo em -20℃.
Usando Micgene 242/244/244IVD e ABI QuantStudio 5:
os procedimentos são ajustados como abaixo:
| Etapas |
Número de ciclo
|
Temperatura |
Tempo |
| 1 |
1 |
95℃ |
3min |
| 2 |
45 |
95℃ |
10s |
| 60℃ |
30sCollect o fluorescente
|
FAM foi selecionado para o canal da detecção.
Os resultados da interpretação
| Resultados |
Valor do Ct |
| Positivo |
Ct≤45 |
| Negativo |
Nenhum valor do Ct ou Ct value≥45 |
| Área de cinza |
40<Ct≤45 |
Nota: O resultado é julgado para ser a área cinzenta, que precisa de ser verificada novamente. Se verifique novamente o resultado é valor do Ct < 45="" is="" considered="" as="" positive="">
Análise do resultado:
Análise automática usando a instrumentação
Controle da qualidade:
Controle negativo: Nenhuma curva óbvia da amplificação do canal da detecção de FAM;
Controle positivo: O canal de FAM mostrou a curva óbvia da amplificação, valor ≤30 do Ct;
As circunstâncias acima são estadas conformes simultaneamente na mesma experiência; de outra maneira, a experiência é inválida e reexaminar é exigido.
