Jogo ácido nucleico da detecção do PCR do jogo parahaemolyticus do Vibrio
(Método PCR-fluorescente da ponta de prova)
Uso pretendido:
Este jogo é apropriado para a detecção específica de vibrio patogênico parahaemolyticus (Vpa) na isca, nas amostras de água, nas plântulas do camarão, nos tecidos do camarão e em produtos processados.
Princípio:
Este jogo usa um fragmento específico do Vibrio parahaemolyticus (Vpa) para projetar uma ponta de prova da ponta de prova da primeira demão, que possa especificamente ligar a uma SEÇÃO do molde do ADN no meio da região da amplificação da primeira demão. Durante o processo da extensão do PCR, a atividade do exonuclide da enzima de Taq corta o 5" - terminal fluoróforo da ponta de prova e fá-lo livre no sistema de reação. Assim, o 3" - o grupo extinto extremidade foi separado, e a fluorescência foi emitida, que foi detectada pelo instrumento do PCR da fluorescência para conseguir a detecção de ácido nucleico parahaemolyticus do Vibrio (Vpa) no sistema de reação completamente fechado.
Componentes principais:
| Componente |
Especificação |
| Líquido da reação do PCR |
24 tubos |
| Controle positivo |
1 tubo |
| Controle negativo |
1 tubo |
Nota: os componentes em grupos diferentes de jogos não devem ser permutáveis.
Exigências da amostra:
1. Tipo da amostra
Plântula do camarão, tecido do camarão, corpo da água, isca, produtos processados, etc.
2. Prove a coleção e o transporte
Prove a coleção e o transporte será realizado de acordo com NY/T 541. As amostras serão transportadas ao laboratório o mais cedo possível sob circunstâncias refrigeradas para evitar a gelo-aproximação amigável repetida.
3. Preservação da amostra
Pode ser armazenado por 24 horas em 2℃~8℃, e pode ser armazenado por muito tempo em -20℃.
Usando Micgene 242/244/244IVD e ABI QuantStudio 5:
os procedimentos são ajustados como abaixo:
| Etapas |
Número de ciclo
|
Temperatura |
Tempo |
| 1 |
1 |
95℃ |
3min |
| 2 |
45 |
95℃ |
10s |
| 60℃ |
30sCollect o fluorescente
|
FAM foi selecionado para o canal da detecção.
Os resultados da interpretação
| Resultados |
Valor do Ct |
| Positivo |
Ct≤40 |
| Negativo |
Nenhum valor do Ct ou Ct value≥45 |
| Área de cinza |
40<Ct<45>
|
Nota: O resultado é julgado para ser a área cinzenta, que precisa de ser verificada novamente. Se verifique novamente o resultado é valor do Ct < 45="" is="" considered="" as="" positive="">
Análise do resultado:
Análise automática usando a instrumentação
Controle da qualidade:
Controle negativo: Nenhuma curva óbvia da amplificação do canal da detecção de FAM;
Controle positivo: O canal de FAM mostrou a curva óbvia da amplificação, valor ≤30 do Ct;
As circunstâncias acima são estadas conformes simultaneamente na mesma experiência; de outra maneira, a experiência é inválida e reexaminar é exigido.
