JOGO quente do TESTE da venda TSH ELISA
Referência: Testes DS177701 96
Uso pretendido
Immunoassay para in vitro a determinação quantitativa do thyrotropin no soro humano.
1. Sumário
- a hormona deestimulação (TSH, thyrotropin) é uma glicoproteína que tem um peso molecular de aproximadamente 30000 daltons e que consiste em duas subunidades.
- A medida do soro da concentração do thyrotropin muitas vezes (TSH), de uma glicoproteína com um peso molecular de 28.000 daltons e segregado do pituitário anterior, é considerada geralmente como o indicador o mais sensível disponível para o diagnóstico do hipotiroidismo (pituitário) preliminar e secundário (1,2).
- As medidas de TSH são ingualmente úteis em diferenciar o hipotiroidismo (hypothalamic) secundário e terciário da doença de tiroide preliminar. A liberação de TSH do pituitário é regulada pelo fator de liberação do thyrotropin (TRH), que é segregado pelo hipotálamo, e pela ação direta de T4 e de triiodothyronine (T3), as hormonas de tiroide, no pituitário.
- Os níveis do aumento de T3 e de T4 reduzem a resposta do pituitário aos efeitos stimulatory de TRH. No hipotiroidismo secundário e terciário, as concentrações de T4 são geralmente baixas e os níveis de TSH são geralmente baixos ou normais. A deficiência pituitária de TSH (hipotiroidismo secundário) ou a insuficiência de estimulação do pituitário por TRH (hipotiroidismo terciário) causam esta.
- O teste da estimulação de TRH diferencia estas circunstâncias. No hipotiroidismo secundário, a resposta de TSH a TRH blunted quando uma resposta normal ou atrasada for obtida no hipotiroidismo terciário. Mais, o advento de ensaios immunoenzymometric forneceu o laboratório a suficiente sensibilidade para permitir a diferenciação do hipertireoidismo da população euthyroid e o alargamento da utilidade de medidas de TSH. Este método é um ensaio de segunda geração, que fornecem os meios para a discriminação na escala hyperthyroid-euthyroid. (3)
2. Os materiais dos reagentes forneceram
• Microplate revestido, 8 X12 tiras, 96 poços, pré-revestidos com o anti-TSH monoclonal do rato.
• Calibradores, 6 tubos de ensaio, 1 ml cada um, prontos para uso; Concentrações: 0 (A), 0,5 (B), 2 (C), 5 (D), 10 (E) e 25 (F) μIU/mL.
• O conjugado da enzima, 1 tubo de ensaio, 6,0 ml de HRP (peroxidase do armorácio) etiquetou o rato anti-TSH monoclonal no amortecedor Tris-NaCl que contém BSA (albumina de soro bovino). Contém 0,1% preservativos ProClin300.
• Carcaça, 1 tubo de ensaio, 11ml, pronto para uso, (tetramethylbenzidine) TMB.
• Pare a solução, 1 tubo de ensaio, 6,0 ml de 1 mol/l de ácido sulfúrico.
• Concentrado da solução da lavagem, 1 tubo de ensaio, 25 ml (40X se concentrou), solução da lavagem do PBS-Tween.
• IFU, 1 cópia.
• Tampa da placa: 1 parte.
Materiais exigidos (mas não fornecido)
• Leitor de Microplate com capacidade absorvente do comprimento de onda 450nm e 620nm.
• Arruela de Microplate.
• Incubadora.
• Abanador da placa.
• Micropipettes e micropipettes multichannel que entregam 50μl com uma precisão de melhor de 1,5%.
• Papel absorvente.
• Água destilada
3. Procedimento de teste
Assegure-se de que as amostras, os calibradores, e os controles dos pacientes estejam na temperatura ambiental (℃ 18-25) antes da medida. Misture todos os reagentes com delicadamente da inversão antes do uso.
• Use somente o número de poços exigidos e formate os poços dos microplates para que cada calibrador e amostra seja analisada. • Adicione o µL 25 dos calibradores ou das amostras a cada poço.
• Adicione o µL 100 do conjugado da enzima a cada poço.
• Agite o microplate delicadamente por 30 segundos para misturar.
• Cubra a placa com uma tampa da placa e incube-a em 37℃ por 60 minutos.
• Rejeite os índices da micro placa pela decantação ou pela aspiração. Se decantando, bata e borre o seco de placa com papel absorvente.
• Adicione o µL 350 da solução da lavagem, decante-o (torneira e mancha) ou aspire-o. Repita 4 vezes adicionais para um total de 5 lavagens. Uma arruela automatizada da tira do microplate pode ser usada. No fim da lavagem, inverta a placa e bata para fora toda a solução residual da lavagem no papel absorvente.
• Adicione o µL 100 da carcaça a cada poço.
• Cubra e incube na temperatura ambiental (18-25℃) na obscuridade para a reação por 20 minutos. Não agite a placa após a adição do substate.
• Adicione o µL 50 da solução da parada a cada poço.
• Agite por 15-20 segundos para misturar o líquido dentro dos poços. É importante assegurar-se de que as mudanças azuis da cor a amarelar completamente.
• Leia a absorvência de cada poço em 450 nanômetro (que usa 620 a 630 nanômetro como o comprimento de onda da referência para minimizar imperfeições boas) em um micro leitor da placa. Os resultados devem ser lidos dentro de 30 minutos da adição param a solução
