TESTE KIT Thyroglobulin Ab do Anti-Tg ELISA
1. Uso pretendido
Immunoassay para in vitro a determinação quantitativa dos anticorpos ao thyroglobulin no soro humano. A anti determinação do Tg do ‐ é usada como um auxílio na detecção de doenças de tiroide autoimunes.
2. Sumário
O Thyroglobulin (Tg) é produzido na glândula de tiroide e é um componente principal no lúmen do folículo do tiroide. Na sinergia com a peroxidase específica do ‐ do tiroide da enzima (TPO), o Tg tem uma função essencial no iodination de L tirosina do ‐ e na formação das hormonas de tiroide T4 e T3. Os Tg e TPO são potencialmente autoantigenic.
As concentrações elevadas do soro de anticorpos contra Tg (autoantibodies do ‐ do Tg) são encontradas nos assuntos com ‐ da autoimunidade basearam o thyroiditis. As concentrações altas do anti ‐ Tg junto com o anti ‐ TPO são indicativas do thyroiditis infiltrante do ‐ lymphocytic crônico (a doença de Hashimoto). A frequência de anticorpos do thyroglobulin é aproximadamente 70 o ‐ 80% nos assuntos com thyroiditis autoimune do ‐, incluindo a doença de Hashimoto, e o aproximadamente 30% nos indivíduos com doença de sepulturas. O anti ensaio do Tg do ‐ é importante para o uso em monitorar o curso do thyroiditis de Hashimoto e para o diagnóstico diferencial (casos do thyroiditis autoimune suspeitado da origem desconhecida com anti resultados da análise negativos do ‐ TPO, a doença de sepulturas sem infiltração lymphocytic, e para ordenar para fora a interferência por autoantibodies do ‐ do Tg no teste do Tg).
Embora a sensibilidade do procedimento possa ser aumentada simultaneamente determinando anticorpos adicionais do tiroide (anti ‐ TPO, de ‐ de TSH anticorpos do ‐ do receptor), um resultado negativo não ordena definitivamente para fora a presença de uma doença autoimune. O nível do titer do anticorpo não correlaciona com a atividade clínica da doença. Os Titers que são elevados inicialmente podem tornar-se negativos se a doença persiste por um período de tempo mais longo ou se
a remissão ocorre. Se os anticorpos reaparecem após a remissão, ter uma recaída é provável.
A enzima ligou ensaios da imunoabsorção usa os anticorpos humanos de IgG do antihuman do antígeno e do coelho (anti-IgG).
os materiais 3.Reagents forneceram
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Microplate revestido, 8 X12 tiras, 96 poços. Pré-revestido com o antígeno humano do TG.
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Calibradores, 6 tubos de ensaio, 1 mL cada um, prontos para uso; Concentrações: 0 (A), 50 (B), 150 (C), 500 (D), 1000 (E) e 2000 (F) IU/mL.
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O conjugado da enzima, 1 tubo de ensaio, 11,0 mL de HRP (peroxidase do armorácio) etiquetou o coelho os anti anticorpos humanos de IgG (anti-IgG) no amortecedor Tris-NaCl que contém BSA (albumina de soro bovino). Contém 0,1% preservativos ProClin300.
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Diluente do soro: 1 tubo de ensaio, 11mL. Contendo sais do amortecedor e uma tintura
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Concentrado da solução da lavagem, 1 tubo de ensaio, 25 ml (40X se concentrou), solução da lavagem do PBS-Tween.
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Carcaça, 1 tubo de ensaio, 11ml, pronto para uso, (tetramethylbenzidine) TMB.
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Pare a solução, 1 tubo de ensaio, 6,0 ml de 1 mol/l de ácido sulfúrico.
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IFU, 1 cópia.
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Tampa da placa: 2 partes.
4. Materiais exigidos (mas não fornecido)
- Leitor de Microplate com capacidade absorvente do comprimento de onda 450nm e 620nm.
- Arruela de Microplate.
- Incubadora.
- Abanador da placa.
- Micropipettes e micropipettes multichannel que entregam 50µl com uma precisão de melhor de 1,5%.
- Papel absorvente.
- Água destilada
5. Procedimento de teste
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Use somente o número de poços exigidos e formate os poços do microplate para que cada calibrador e amostra seja analisada.
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Adicione o µL 100 dos calibradores a cada poço.
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Adicione o µL 100 do diluente da amostra (cor verde) a cada poço exceto os Calibrador-poços.
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Adicione o µL 10 da amostra a cada poço do diluente da amostra (NOTA: Os reagentes em Wells girarão a cor azul do verde), a seguir agitam 30 segundos.
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Cubra a placa com uma tampa da placa e incube-a no °C 37 por 30 minutos.
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Rejeite os índices da micro placa pela decantação ou pela aspiração. Se decantando, bata e borre o seco de placa com papel absorvente.
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Adicione o µL 350 da solução da lavagem, decante-o (torneira e mancha) ou aspire-o. Repita 4 vezes adicionais para um total de 5 lavagens. No fim da lavagem, inverta a placa e bata para fora toda a solução residual da lavagem no papel absorvente.
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Adicione o µL 100 do conjugado da enzima,
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Cubra a placa com uma tampa da placa e incube-a no °C 37 por 30 minutos
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Adicione o µL 350 da solução da lavagem, decante-o (torneira e mancha) ou aspire-o. Repita 4 vezes adicionais para um total de 5 lavagens. No fim da lavagem, inverta a placa e bata para fora toda a solução residual da lavagem no papel absorvente.
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Adicione o µL 100 da carcaça a cada poço. Cubra e incube na temperatura ambiental (18-25℃) na obscuridade para a reação por 10 minutos. Não agite a placa após a adição do substate.
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Adicione o µL 50 da solução da parada a cada poço.
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Agite por 15-20 segundos para misturar o líquido dentro dos poços. É importante assegurar-se de que as mudanças azuis da cor a amarelar completamente.
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Leia a absorvência de cada poço em 450 nanômetro (que usa 620 a 630 nanômetro como o comprimento de onda da referência para minimizar imperfeições boas) em um micro leitor da placa. Os resultados devem ser lidos dentro de 30 minutos da adição param a solução.
