Rato E-Cadherin, E-Cad ELISA Kit
Este jogo de ELISA usa o sanduíche-ELISA como o método. O stripplate de Microelisa fornecido neste jogo foi pré-revestido com um anticorpo específico ao E-Cad. Os padrões ou as amostras são adicionados aos poços apropriados do stripplate de Microelisa e combinaram ao anticorpo específico. Então uma peroxidase do armorácio (HRP) - anticorpo conjugado específico para o E-Cad é adicionada a cada stripplate de Microelisa bem e incubada. Os componentes livres são lavados afastado. A solução da carcaça de TMB é adicionada a cada poço. Somente aqueles poços que contêm o E-Cad e o anticorpo E-Cad conjugado HRP parecerão azuis na cor e girarão então amarelo após a adição da solução da parada. A densidade ótica (OD) é medida spectrophotometrically em um comprimento de onda de 450 nanômetro. O valor do OD é proporcional à concentração de E-Cad. Você pode calcular a concentração de E-Cad nas amostras comparando o OD das amostras à curva padrão.
Materiais fornecidos com o jogo
| |
Materiais fornecidos com o jogo |
48 determinações |
96 determinações |
Armazenamento |
| 1 |
Manual do usuário |
1 |
1 |
R.T. |
| 2 |
Membrana da placa de fechamento |
2 |
2 |
R.T. |
| 3 |
Sacos selados |
1 |
1 |
R.T. |
| 4 |
Stripplate de Microelisa |
1 |
1 |
2-8℃ |
| 5 |
Padrão: 108pg/ml |
garrafa 0.5ml×1 |
garrafa 0.5ml×1 |
2-8℃ |
| 6 |
Diluente padrão |
garrafa 1.5ml×1 |
garrafa 1.5ml×1 |
2-8℃ |
| 7 |
Reagente do HRP-conjugado |
garrafa 3ml×1 |
garrafa 6ml×1 |
2-8℃ |
| 8 |
Diluente da amostra |
garrafa 3ml×1 |
garrafa 6ml×1 |
2-8℃ |
| 9 |
Solução A do cromogêneo |
garrafa 3ml×1 |
garrafa 6ml×1 |
2-8℃ |
| 10 |
Solução B do cromogêneo |
garrafa 3ml×1 |
garrafa 6ml×1 |
2-8℃ |
| 11 |
Pare a solução |
garrafa 3ml×1 |
garrafa 6ml×1 |
2-8℃ |
| 12 |
Solução da lavagem |
20ml (20X) ×1bottle |
20ml (30X) ×1bottle |
2-8℃ |
Procedimento
Diluição dos padrões
os poços 1.Ten são ajustados para padrões em um stripplate de Microelisa. Em bem 1 e bem em 2, a solução 100μl padrão e o amortecedor padrão da diluição 50μl são adicionados e misturados bem. Em bem 3 e bem em 4, a solução 100μl de bem 1 e 2 é adicionada bem respectivamente. Então o amortecedor padrão da diluição 50μl é adicionado e misturado bem. a solução 50μl é rejeitada do poço 3 e bem 4. Em bem 5 e bem em 6, a solução 50μl de bem 3 e 4 é adicionada bem respectivamente. Então o amortecedor padrão da diluição 50μl é adicionado e misturado bem. Em bem 7 e bem em 8, a solução 50μl de bem 5 e 6 é adicionada bem respectivamente. Então o amortecedor padrão da diluição 50μl é adicionado e misturado bem. Em bem 9 e bem em 10, a solução 50μl de bem 7 e 8 é adicionada bem respectivamente. Então o amortecedor padrão da diluição 50μl é adicionado e misturado bem. a solução 50μl é rejeitada do poço 9 e bem 10. Após a diluição, o volume total em todos os poços é 50μl e as concentrações são 24ng/ml, 16 ng/ml, 8 ng/ml, 4ng/ml e 2ng/ml, respectivamente.
2. No stripplate de Microelisa, deixe um poço vazio como o controle vazio. Em poços da amostra, o amortecedor da diluição da amostra 40μl e a amostra 10μl é adicionado (o fator da diluição é 5). As amostras devem ser carregadas na parte inferior sem tocar na parede boa. Misture bem com a agitação delicada.
3. Incubação: incube o minuto 30 em 37℃ após selado com a membrana da placa de fechamento.
4. Diluição: dilua o amortecedor de lavagem concentrado com a água destilada (30 vezes para 96T e 20 vezes para 48T).
5. Lavagem: descasque com cuidado fora a membrana da placa de fechamento, aspire-a e reencha-a com a solução da lavagem. Rejeite a solução da lavagem após o descanso por 30 segundos. Repita o procedimento de lavagem por 5 vezes.
6. Adicione o reagente do HRP-conjugado de 50 μl a cada poço exceto o controle vazio bem.
7. Incubação como descrito em etapa 3.
8. Lavagem como descrito em etapa 5.
9. Coloração: Adicione a solução A do cromogêneo de 50 μl e a solução B a cada poço, mistura do cromogêneo de 50 μl com delicadamente agitação e incube-os em 37℃ por 15 minutos. Evite por favor a luz durante a coloração.
10. Terminação: adicione 50 que o μl para a solução a cada poço para terminar a reação. A cor no poço deve mudar do azul para amarelar.
11. A absorvência lida O.D. em 450nm usando um leitor da placa de Microtiter. O valor do OD do controle vazio é ajustado bem como zero. O ensaio deve ser realizado dentro de 15 minutos após a adição para a solução.
Precisão
precisão do Intra-ensaio (precisão dentro de um ensaio): 3 amostras com baixo, E-Cad médio e de nível elevado foram testadas 20 vezes em uma placa, respectivamente.
precisão do Inter-ensaio (precisão entre ensaios): 3 amostras com baixo, E-Cad médio e de nível elevado foram testadas em 3 placas diferentes, 8 replicates em cada placa.
CV (%) = SD/meanX100
Intra-ensaio: CV<10>
Inter-ensaio: CV<12>
Escala do ensaio
0.6pg/ml -80pg/ml
Sensibilidade:
0,1 pg/ml
