Tipo jogo simétrico canino do sanduíche de Dimethylarginine ELISA personalizado com 2 horas de tempo do ensaio

Tipo jogo simétrico canino do sanduíche de Dimethylarginine ELISA personalizado com 2 horas de tempo do ensaio

Cat.No E0179 Ca

Reagente fornecido

Material exigido mas não fornecido

• Incubadora 37°C±0.5°C
• Papel absorvente
• Pipeta da precisão e pontas descartáveis da pipeta
• Limpe os tubos
• Deionized ou água destilada
• Leitor de Microplate com 450 o filtro do comprimento de onda do ± 10nm

Princípio do ensaio

Este jogo do ensaio do elisa é um ensaio Enzima-ligado da imunoabsorção (ELISA). A placa foi pré-revestida com o anticorpo canino de SDMA. SDMA apresentam na amostra são adicionados e ligam aos anticorpos revestidos nos poços. E o anticorpo canino então biotinylated de SDMA é adicionado e liga a SDMA na amostra. Então Streptavidin-HRP é adicionado e liga ao anticorpo de Biotinylated SDMA. Após a incubação Streptavidin-HRP desatado é lavado afastado durante uma etapa de lavagem. A solução da carcaça é adicionada então e a cor torna-se em proporção à quantidade de SDMA canino. A reação é terminada pela adição de ácido para a solução e a absorvência é medida em 450 nanômetro.

Escala padrão da curva: 5nmol/L - 1500nmol/L

Sensibilidade: 2.45nmol/L

Armazenamento: Armazene os reagentes em 2-8°C. para um armazenamento de mais de 6 meses referem a data de validade mantêm-no em ciclos repetidos Avoid da aproximação amigável de -20°C. Se os reagentes individuais são abertos recomenda-se que o jogo esteja usado dentro de 1 mês.

o produto dos *This é para o uso da pesquisa somente, não para o uso em procedimentos do diagnóstico. É recomenda altamente ler inteiramente antes de usar esta instrução.

Precauções

• Antes do uso, o jogo e a amostra do ensaio do elisa devem ser aquecidos naturalmente à temperatura ambiente 30 minutos.
• Esta instrução deve restritamente ser seguida na experiência.
• Uma vez que o número desejado de tiras foi removido, reseal imediatamente o saco para proteger permanecer da deterioração. Cubra todos os reagentes quando não no uso.
• Make sure que introduz com pipeta a ordem e a taxa de adição de bem-a-bem ao introduzir com pipeta reagentes.
• A pipeta derruba e o aferidor da placa à disposição deve ser limpo e descartável para evitar a contaminação colateral.
• Evite usar os reagentes dos grupos diferentes junto.
• A solução B da carcaça é sensível à luz, não expõe a solução B da carcaça para iluminar-se por muito tempo.
• Pare a solução contém o ácido. Vista por favor a proteção do olho, da mão e de pele ao usar este material. Evite o contato da pele ou das mucosas com reagente do jogo.
• O jogo do ensaio do elisa não deve ser usado além da data de validade.

Coleção de espécime

O soro permite que o soro coagule por 10-20 minutos na temperatura ambiente. Centrifugador em 2000-3000 RPM por 20 minutos.

O plasma recolhe o plasma usando o EDTA ou a heparina como um anticoagulante. Centrifugue amostras por 15 minutos em 2000-3000 RPM em 2 - 8°C dentro de 30 minutos da coleção.

A urina recolhe pelo tubo estéril. Centrifugador em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Ao recolher o líquido fluido e cerebrospinal pleuroperitoneal, siga por favor os procedimentos acima mencionados.

O Supernatant da cultura celular recolhe pelos tubos estéreis ao examinar segregue componentes. Centrifugue em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Recolha os supernatants com cuidado. Ao examinar os componentes dentro da pilha, use PBS (pH 7.2-7.4) para diluir a suspensão da pilha à concentração da pilha de aproximadamente 1 million/ml. Danifique pilhas através dos ciclos repetidos da gelo-aproximação amigável para deixar para fora os componentes internos. Centrifugue em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.

O tecido outros líquidos de corpo enxágua tecidos em PBS (pH 7,4) para remover completamente o sangue adicional e para pesá-lo antes da homogeneização. Triture tecidos e homogeneize-os em PBS (pH7.4) com um homogenizador de vidro no gelo. Aproximação amigável em 2-8°C ou gelo no centrifugador de -20°C. em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.

o *Sample não pode ser diluído com este jogo. Devido o ao material nós usamo-nos para preparar o jogo, a interferência de matriz da amostra pode falsamente comprimir a especificidade e a precisão do ensaio.

Procedimento de ensaio

1. Prepare todos os reagentes, soluções padrão e amostras como instruídas. Traga todos os reagentes à temperatura ambiente antes de usar. O ensaio é executado na temperatura ambiente.

2. Determine o número de tiras exigidas para o ensaio. Introduza as tiras nos quadros para o uso. As tiras não utilizadas devem ser armazenadas em 2-8°C.

3. Adicione o padrão 50μl ao padrão bem. Nota: Não adicione o anticorpo ao padrão bem porque a solução padrão contém o anticorpo biotinylated.

4. Adicione a amostra 40μl aos poços da amostra e então adicione o anti-SDMA anticorpo 10μl aos poços da amostra, a seguir adicione o streptavidin-HRP 50μl aos poços da amostra e aos poços padrão (poço do controle não vazio). Misture bem. Cubra a placa com um aferidor. Incube 60 minutos em 37°C.

5. Remova o aferidor e lave a placa 5 vezes com amortecedor da lavagem. Embeba poços com pelo menos o amortecedor da lavagem de 0,35 ml para 30 segundos a 1 minuto para cada Washington. Para a lavagem automatizada, aspire todos os poços e lave 5 vezes com o amortecedor da lavagem, enchendo em demasia jorra com amortecedor da lavagem. Borre a placa nas toalhas de papel ou no outro material absorvente.

6. Adicione a solução A da carcaça 50μl a cada um poço e adicione então a solução B da carcaça 50μl a cada um bem. Incube a placa coberta com um aferidor novo por 10 minutos em 37°C na obscuridade.

7. Adicione 50μl param a solução a cada um bem, a cor azul mudará no amarelo imediatamente.

8. Determine a densidade ótica (valor do OD) de cada um poço que usa imediatamente um grupo do leitor do microplate a 450 nanômetro dentro de 10 minuetos após ter adicionado a solução da parada.

Cálculo de resultado

Construa uma curva padrão traçando o OD médio para cada padrão no vertical (Y) linha central contra a concentração no horizontal (X) a linha central e tira uma melhor curva do ajuste através dos pontos no gráfico. Estes cálculos podem melhor ser executados com o software por computador do curva-encaixe e a melhor linha do ajuste pode ser determinada pela análise de regressão.