Protocolo de ensaio ELISA
Marcar as tiras individuais que serão utilizadas e os reagentes aliquotados como exemplo:
| Componente |
Volume por reação |
24 Reacções |
| Anticorpo #1 da canamicina |
50 uL |
1.2 ml |
| HRP-Conjugado Ab #2 |
50 uL |
1.2 ml |
| 1X Solução de lavagem |
10,0 ml |
24 ml |
| Parar tampão |
100 L |
2.4 ml |
| Substrato TMB |
100 L |
2.4 ml |
- Adicionar 50 I.L. de cada um dos Standards de Canamicina em duplicado em poços diferentes (Adicionar os Standards à placa apenas na ordem de baixa concentração para alta concentração).
- Adicionar 50 litros de cada amostra em duplicado em poços de amostragem diferentes.
- Adicione 50 I.L. de HRP-Conjugated Ab#2 a cada poço e 50 I.L. de Anticorpo #1 de Kanamicina a cada poço.
- Incube o prato durante 30 minutos a temperatura ambiente (20 ¢ 25°C / 68 ¢ 77°F). (É recomendável cobrir a placa de microtiter durante a incubação.)).
- Lave o prato 4 vezes com 250 I.L. de 1 X Solução de Lavar. Após a última lavagem, inverta o prato e bata suavemente o prato para secar em toalhas de papel (Faça o próximo passo imediatamente após a lavagem dos pratos.Não permitir que a chapa seque ao ar entre as etapas de trabalho).
- Adicione 100L de substrato de TMB. Tempo da reação imediatamente após a adição do substrato. Misture a solução balançando suavemente a placa manualmente por 30s enquanto incubaçãoQualquer solução de substrato que apresente coloração indica deterioração e deve ser descartada.Recomenda-se cobrir a placa de microtiter durante a incubação)).
- Após incubação durante 15 minutos a temperatura ambiente (20 ¢ 25°C / 68 ¢ 77°F), adicionar 100 I.U. de tampão para parar a reacção enzimática.
- Leia a placa o mais rapidamente possível após a adição do tampão de parada num leitor de placas com comprimento de onda de 450 nm (Antes da leitura,utilizar uma toalha sem pêlos na parte inferior da placa para garantir que a umidade ou as impressões digitais não interferem com as leituras).
