REAGEN^TMFuraltadona ((AMOZ) ELISA Test Kit fornece um enzima imunotest competitivo para a análise quantitativa de furaltadona em peixe, camarão, carne (frango, carne bovina, carne de porco e hepar), ovos, mel.

Métodos de extracção rápidos (4 horas), de elevada recuperação (80-105%) e de baixo custo para várias amostras.
Alta sensibilidade (0,05 ng/g ou ppb) e baixo limite de detecção (0,1 ng/g ou ppb) para várias amostras.
Alta reprodutibilidade.
Um ensaio ELISA rápido (menos de 1 hora, independentemente do número de amostras).

Resumo do procedimento

O método baseia-se num ensaio ELISA colorimétrico competitivo. O AMOZ-BSA foi revestido nos poços das placas.A amostra e o anticorpo AMOZ são adicionados juntamente com o anticorpo secundárioSe o resíduo de AMOZ estiver presente na amostra, competirá pelo anticorpo AMOZ,impedindo assim que o anticorpo se ligue ao AMOZ-BSA ligado ao poçoA intensidade de cor resultante, após adição do substrato HRP (TMB), tem uma relação inversa com a concentração de resíduos de AMOZ na amostra.

Conteúdo do kit, armazenagem e prazo de validade

REAGEN^TMO kit de ensaio ELISA de furaltadona (AMOZ) tem capacidade para 96 determinações ou testes de 42 amostras duplicadas (assumindo 12 poços para padrões).Devolver os micro-cavidades não utilizados para o saco de papel alumínio e re-selar com o dessecante fornecido na embalagem original. Conservar o kit a 2- 8°C.* O prazo de validade é de 12 meses quando o kit estiver devidamente armazenado.

Conteúdo do kit	Montante	Armazenamento
Placa revestida por AMOZ	1 placa de 96 poços (8 poços x 12 tiras)	2-8°C
Padrões AMOZ: Controle negativo (tubo com tampa branca) 00,0 5 ng/ml (tubo amarelo) 00,15 ng/mL (tubo de tampa laranja) 00,45 ng/mL (tubo com tampa cor-de-rosa) 1.35 ng/mL (tubo de tampa roxa) 40,05 ng/mL (tubo com tampa azul) 10 ng/mL (spiking, opcional, tubo com tampa vermelha)	1.5 ml 1.5 ml 1.5 ml 1.5 ml 1.5 ml 1.5 ml 1.5 ml	2-8°C 2-8°C
AMOZ Anticorpo (Anticorpo#1)	4 ml
Anticorpo conjugado HRP #2	6 ml	2-8°C
10X Buffer de extracção de amostras	25 ml
20X Solução de lavagem	28 mL
Parar tampão	20 ml
Substrato TMB	12 ml
50 mM de 2-nitrobenzaldeído	20,0 ml

* Se não pretende utilizar o kit durante mais de 1 mês, conserve o Antibody #1 e o HRP- Conjugated Antibody #2 a - 20°C ou num congelador.

Sensibilidade (Limite de detecção)

Tipo de amostra	Limite de detecção(ng/g ou ppb)
Peixes/Camarões	0.1
Carne (frango, carne bovina, carne de porco e hepar)	0.1
Potência dos ovos	0.1
Querida.	0.1

Especificidade (reatividade cruzada)

Analíticos	Reatividade cruzada(%)
Amós	100
AOZ	< 0.04
AHD	< 0.06
SEM	< 0.05

Materiais necessários não fornecidos com o kit

1Leitor de placas de microtiter (450 nm)

2- Incubadora.

3. Misturador de tecidos (por exemplo, Omni TissueMaster Homogenizer)

4Evaporador rotativo ou gás nitrogénio

5. Misturador de vórtices (por exemplo, misturador de vórtices Gneie da VWR)

6.10, 20, 100 e 1000 ml de pipetas

7.Pipeta multicanal: 50-300 ml (opcional)

8.Acetato de etilo

9.0.1 M K2HPO4

10.n-hexano (ou n-heptano)

11.1M NaOH

12.1M HCL

Advertências e precauções

Os padrões contêm Furaltadone.
Não utilize o kit após a data de validade.
Não misture reagentes de kits ou lotes diferentes, exceto para componentes com o mesmo número de peça dentro das datas de validade.
Tente manter uma temperatura de laboratório de 20° 25° C (68° 77° F). Evite conduzir testes sob ou perto de aberturas de ar, pois isso pode causar resfriamento, aquecimento e/ou evaporação excessivos.Não execute ensaios à luz solar direta, uma vez que isto pode causar calor e evaporação excessivos.Os bancos frios devem ser evitados colocando várias camadas de toalha de papel ou outro material isolante sob as placas de ensaio durante a incubação..

Certifique-se de utilizar apenas água destilada ou desionizada, uma vez que a qualidade da água é muito importante.
Ao pipetar amostras ou reagentes numa placa de microtiter vazia, colocar as pontas da pipeta no canto inferior do poço, em contacto com o plástico.

As incubações das placas de ensaio devem ser cronometradas com a maior precisão possível.

Adicionar padrões à placa apenas na ordem de baixa concentração para alta concentração, pois isso minimizará o risco de comprometer a curva padrão.
Manter sempre as placas refrigeradas em sacos selados com um dessecante para manter a estabilidade.Prevenir a formação de condensação nas placas, permitindo-lhes equilibrar- se à temperatura ambiente (20°C / 68°F) enquanto estão na embalagem.

Preparação da amostra

Certifique-se de que as amostras estão devidamente armazenadas. Em geral, as amostras devem ser refrigeradas a 2-4°C durante não mais de 1-2 dias.As amostras congeladas podem ser descongeladas a temperatura ambiente (20 25 ° C / 68 77 ° F) ou numa geladeira antes de serem utilizadas.

Peixe

Misturar 1 g da amostra homogeneizada com 0,5 ml de tampão de extracção de amostra de 1 x, 3,5 ml de água destilada, 0,5 ml de 1 M HCl e 20 ml de 50 mM de 2-nitrobenzaldeído, por vortexagem durante 30 segundos.
Incubação a 50°C - 55°C durante 3 horas.
Adicionar 5 ml de 0,1 M K2HPO4, 0,4 ml de 1 M NaOH e 6 ml de acetato de etilo, em vórtice durante 2 minutos.
Centrifugar a 4.000 x g durante 5 minutos a temperatura ambiente (20°C 25°C).
Transferir 3 ml do supernatante de acetato de etilo (correspondente a 0,5 g da amostra original) para um novo frasco para injectáveis (F Evite a camada aquosa inferior!centrifugar o acetato de etilo extraído durante 5 minutos a 4Se a emulsão ocorrer e a camada superior de acetato de etilo for inferior a 3 ml, incubar a amostra num banho de água durante 3 minutos a 85 °C.Usar um evaporador rotativo para secar a amostra num banho de água de 60 a 70 °C sob pressão reduzidaAlternativamente, a amostra pode ser secada soprando gás nitrogénio num banho de água a 60°C.
Dissolver o resíduo seco em 1 ml de n-hexano (ou n-heptano).
Adicionar 1 ml de1XBuffer de extracção de amostra, torná-la em vórtice durante 2 minutos.
Centrifugar a amostra a 4.000 x g durante 10 minutos a temperatura ambiente (20°C / 68°F).
Para o ensaio, utilizar 50 ml da camada aquosa inferior por poço.

Nota:Fator de diluição: 2. Para evitar um fundo elevado, recomenda-se preparar uma amostra em branco de solvente em paralelo,Começando pela redução de 3 ml de acetato de etilo até secar e prosseguindo com o procedimento de extracção em repousoSubtrair o resultado do controlo com solvente dos resultados da amostra.

Camarões/Carnes/Hepar

Misturar 1 g da amostra homogeneizada com 0,5 ml de tampão de extracção de amostra 1X, 3,5 ml de água destilada, 0,5 ml de 1 M HCl e 20 ml de 50 mM de 2-nitrobenzaldeído, por vortexagem durante 30 segundos.
Incubação a 50°C - 55°C durante 3 horas. Vortex da amostra durante 5 segundos a cada hora durante a incubação.
Adicionar 5 ml de 0,1 M K2HPO4, 0,4 ml de 1 M NaOH e 6 ml de acetato de etilo, em vórtice durante 5 minutos.
Centrifugar a 4.000 x g durante 5 minutos a temperatura ambiente (20°C / 68°F).
Transferir 3, 0 ml do supernatante de acetato de etilo (correspondente a 0,5 g da amostra original de ovo) para um novo frasco para injectáveis (F Evite a camada aquosa inferior!centrifugar o acetato de etilo extraído durante 5 minutos a 4Utilize um evaporador rotativo para secar a amostra num banho de água de 60 a 70 °C sob pressão reduzida.A amostra pode ser secada soprando gás nitrogénio num banho de água de 60 a 70 °C.
Dissolver o resíduo seco em 1 ml de n-hexano (ou n-heptano).
Adicionar 1 ml de1XExtração de amostra tampão e vórtice da amostra durante 2 minutos.
Centrifugar a amostra a 4.000 x g durante 10 minutos a temperatura ambiente (20°C / 68°F).
Para o ensaio, utilizar 50 ml da camada aquosa inferior por poço.

NotasFator de diluição: 2. Para evitar um fundo elevado, recomenda-se preparar uma amostra em branco de solvente em paralelo.começando pela redução de 3 ml de acetato de etilo até à secura e prosseguindo com o procedimento de repousoSubtrair o resultado do controlo com solvente dos resultados da amostra.

Ovos

Misturar 1 g da amostra de ovo com 0,5 ml de tampão de extracção de amostra 1X, 3,5 ml de água destilada, 0,5 ml de 1 M HCl e 20 ml de 50 mM de 2-nitrobenzaldeído, por vortexagem durante 2 minutos.
Incubação a 50°C - 55°C durante 3 horas.
Adicionar 5 mL de 0,1 M K2HPO4, 0,4 mL de 1 M NaOH e 6 mL de acetato de etilo, vórtice 5 minutos à velocidade máxima.
Centrifugar a 4.000 x g durante 10 minutos a temperatura ambiente (20°C / 68°F).
Transferir 3, 0 ml do supernatante de acetato de etilo (correspondente a 0,5 g da amostra original de mel) para um novo frasco para injectáveis (F Evite a camada aquosa inferior!centrifugar o acetato de etilo extraído durante 5 minutos a 4Utilize um evaporador rotativo para secar a amostra num banho de água de 60 a 70 °C sob pressão reduzida.A amostra pode ser secada soprando gás nitrogénio num banho de água de 60 a 70 °C.
Dissolver o resíduo seco em 1 ml de n-hexano (ou n-heptano).
Adicionar 1 ml de1XAmostra de extracção tampão e vórtice por 2 minutos.
Centrifugar a amostra a 4.000 x g durante 10 minutos a temperatura ambiente (20°C / 68°F).
Utilize 50 ml da camada aquosa inferior para o ensaio.

Notas: Fator de diluição: 2. (1) Após a evaporação do extrato de acetato de etilo, o resíduo resultante não é completamente dissolvido.(2) Para esta preparação, recomendamos utilizar 0,5 ng/g ou ppb padrão como valor de corte para amostras positivas, uma vez que as amostras negativas podem apresentar efeitos de fundo consideráveis (em alguns casos entre as normas 0.05 ng/g e 00,15 ng/g).

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