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Jogo do PCR do tempo real do vírus de Monkeypox (sondagem da PCR-fluorescência)
Monkeypox é uma doença zoonotic rara caracterizada pelas erupções de pele causadas pelo vírus de Monkeypox (MPV) e cujos os sintomas clínicos são similares à varíola. Pode ser transmitido através do contato com líquidos corporais, lesões na pele ou em superfícies mucosas internas, como na boca ou a garganta, gotas respiratórias e objetos contaminados. A detecção de ADN viral pela reação em cadeia da polimerase (PCR) é o teste preferido para o monkeypox.
O jogo do PCR do tempo real do vírus de Monkeypox é baseado na tecnologia do PCR do tempo real. Qual é apropriado para a detecção qualitativa de ácidos nucleicos do vírus do monkeypox extraídos das amostras clínicas tais como cotonetes nasais, o cotonete orofaríngeo, a saliva, a urina, o tecido da lesão de pele, o exsudado, e o sangue, etc.
Especificação
| Nome do produto | Jogo do PCR do tempo real do vírus de Monkeypox |
| Canais da detecção | FAM |
| IC | VIC |
| Valor do Ct | 35 |
| Limite de detecção | 200 Copies/mL |
| Armazenamento | -20℃±5℃ |
| Transporte | Sob a circunstância congelada |
| Vida útil | 12 meses |
| Tipo da amostra | Cotonetes nasais, cotonete orofaríngeo, saliva, urina, tecido da lesão, exsudado, e sangue, etc. |
| Pacote | 24 testes/jogo, 48 testes/jogo, 96 testes/jogo |
| Componentes | Amortecedor da reação do PCR, mistura da enzima do PCR, controle positivo, controle negativo |
PRINCÍPIO DO TESTE
Este jogo adota a tecnologia do PCR da fluorescência do tempo real, que é apropriada para a detecção ácida nucleica de vírus do monkeypox extraída das amostras clínicas tais como o soro humano, amostras do exsudado da lesão e os espécimes do cotonete cada sistema de reação contêm primeiras demão específicas e pontas de prova fluorescentes para detectar o vírus, e o ácido nucleico do vírus do monkeypox pode qualitativamente ser detectado recolhendo o sinal fluorescente gerado pela amplificação do PCR.
Além, as primeiras demão específicas e as pontas de prova fluorescentes para o controle padrão interno para a detecção clínica humana do espécime são adicionadas a cada sistema de reação, e a coleção, o transporte e o processo da extração da amostra a ser medida são monitorados, indicando o falso negativo do resultado da análise.
Sistema do PCR do tempo real: Molarray MA-6000, ABI 7500, ViiATM 7, QuantStudio 5, QuantStudio 6/7 pro, QuantStudio 6/7 de cabo flexível, Agilent Mx3000P/3005P, rotor-GeneTM 6000/Q, Bio-Rad CFX96 TouchTM/iQTM 5, Hongshi SLAN-96S/96P, AGS8830, AGS4800.
COMPONENTES
| Especificações | LQ-000301 24T |
LQ-000302 48T |
LQ-000303 96T |
| Amortecedor da reação do PCR | tubo 336μL×1 | tubo 672μL×1 | tubo 672μL×2 |
| Mistura da enzima do PCR | tubo 30μL×1 | tubo 50μL×1 | tubo 100μL×1 |
| Controle positivo | tubo 50μL×1 | tubo 100μL×1 | tubo 200μL×1 |
| Controle negativo | tubo 50μL×1 | tubo 100μL×1 | tubo 200μL×1 |
| Instrução para o uso (PCes) | 1 | 1 | 1 |
ÍNDICE DO DESEMPENHO DE PRODUTO
1. sensibilidade: 200 copies/mL.
2. especificidade: Nenhuma reação transversal com o vírus do enterovírus (EV), de sarampo (milivolt), o vírus da rubéola (rv), o vírus do Varicella-zoster (VZV), o vírus de dengue (DenV), o vírus humano de Parvovirus B19 (HPVB19), de Epstein-barr (EBv), o vírus de herpes humano 6 (HHV-6), etc.
3. precisão: ≤ 5% do CV.
PROCEDIMENTOS
1. Preparações da amostra
A extração do ADN das amostras clínicas é conduzida de acordo com as exigências e os procedimentos correspondentes no jogo da extração do ADN do vírus. Extraído
O ADN pode diretamente ser usado para a detecção. Se a amostra não é detectada imediatamente depois da extração, deve ser armazenada em -70°C para o apoio, evitando ciclos repetidos da gelo-aproximação amigável.
2. Preparação do sistema de reação
(1) preparação do sistema: Remova o reagente do jogo, e permita-o à aproximação amigável completamente na temperatura ambiente. Inverta a mistura e o centrifugador imediatamente. As reações do teste de N (N = número de amostras a ser testadas + controle positivo + controle negativo + 1) são preparadas para sistemas de reação, respectivamente, como segue.
| Componentes | Volume para 1 sistema de reação | Volume para o sistema de reação de N |
| Amortecedor da reação do PCR | 14μL | 14μLx N |
| Mistura da enzima do PCR | 1μL | 1μLx N |
| Volume total | 15μL | 15μLx N |
(2) distribuição de sistema da reação: Misture bem o amortecedor acima da reação, centrifugador, e dispense 15μL das partes alíquota nos tubos do PCR apropriados para o instrumento fluorescente do PCR. (Centrifugue os tubos do PCR em 6,000rpm para que 30s e o transporte prove a zona do tratamento.)
3. Carga da amostra (zona do tratamento da amostra)
Adicione a amostra 10μL ácida nucleica, o controle negativo e o controle positivo aos tubos acima do PCR respectivamente. Tampe os tubos firmemente e o centrifugador em 6,000rpm para 10s e então o transporte à zona da amplificação do PCR.
* precaução: Adicionar amostras na seguinte ordem é
recomendou: amostra ácida nucleica do control-> negativo - > controle positivo.
4. Amplificação do PCR (zona da amplificação do PCR)
4,1 põe os tubos caped do PCR na máquina do PCR do tempo real para a amplificação.
4,2 ajuste da condição do ciclo do PCR da fluorescência
| Programa | Temperatura | Duração da reação | Número de ciclos |
|
1 |
50°C | minuto 2 | 1 |
| 2 | 95°C | 2s | 1 |
| 3 | 95°C | 1s | 41 |
| 60°C | 13s/20s/35s |
Recolha sinais fluorescentes no ℃ do 3:60 da etapa; 35s para ABI 7500, 20s para SLAN-96S/96P, quando 13s para outros sistemas do PCR do tempo real. O volume total: 25μL.
4,3 eliminação após a detecção
Dispõe os tubos do PCR em um saco selado após a reação e trate os tubos usados como desperdícios médicos.
5. Ajustes para a análise do resultado
Ajuste a linha de base em uma região antes da amplificação exponencial onde os sinais fluorescentes de todas as amostras são relativamente estáveis (nenhumas flutuações significativas em todas as amostras); ajuste o ponto de partida (número de ciclo) longe das flutuações do sinal em começar
fase de coleção da fluorescência; ajuste o valor-limite (número de ciclo) 1~3 ciclos antes do Ct da primeira amostra para incorporar a amplificação exponencial. 4~15 ciclos são recomendados.
Ajuste o direito do ponto inicial acima do ponto o mais alto da curva negativa da amplificação do controle (curva irregular do ruído).
6. Critérios do controle da qualidade
Antes de avaliar os resultados do espécime, o controle positivo e o controle negativo devem ser interpretados usando a tabela da interpretação abaixo, e o controle positivo e a curva negativa do controle devem ser executados corretamente, se não o resultado da amostra é inválido.
| Canais Controles |
Valor do ponto inicial do ciclo (Ct) | |
| FAM | VIC | |
| Controle positivo | Ct > 40 ou UNDET | Ct > 40 ou UNDET |
| Controle negativo | ≤ 35 do Ct | ≤ 35 do Ct |
7. Interpretação dos resultados da análise
Os canais para o vírus de Monkeypox, resultado de FAM da detecção devem ser interpretados como abaixo.
a) positivo: O ≤ 38 do Ct e a curva da amplificação S-são dados forma.
b) suspeitou: 38 < Ct=""> 40 ou ≤ nulo 35 do Ct e do Ct no canal de VIC para o segundo teste.
c) negativo: Ct > 40 ou ≤ nulo 35 do Ct e do Ct no canal de VIC.
d) contraprova: Ct > 40 ou Ct nulo e Ct > 35 no canal de VIC.