Amostras rápidas do exsudado da lesão do soro de Kit Real Time For Human do teste do PCR do vírus de Monkeypox

Especificação

PROCEDIMENTOS

1. Preparações da amostra
A extração do ADN das amostras clínicas é conduzida de acordo com as exigências e os procedimentos correspondentes no jogo da extração do ADN do vírus. Extraído

O ADN pode diretamente ser usado para a detecção. Se a amostra não é detectada imediatamente depois da extração, deve ser armazenada em -70°C para o apoio, evitando ciclos repetidos da gelo-aproximação amigável.

2. Preparação do sistema de reação
(1) preparação do sistema: Remova o reagente do jogo, e permita-o à aproximação amigável completamente na temperatura ambiente. Inverta a mistura e o centrifugador imediatamente. As reações do teste de N (N = número de amostras a ser testadas + controle positivo + controle negativo + 1) são preparadas para sistemas de reação, respectivamente, como segue.

(2) distribuição de sistema da reação: Misture bem o amortecedor acima da reação, centrifugador, e dispense 15μL das partes alíquota nos tubos do PCR apropriados para o instrumento fluorescente do PCR. (Centrifugue os tubos do PCR em 6,000rpm para que 30s e o transporte prove a zona do tratamento.)

3. Carga da amostra (zona do tratamento da amostra)
Adicione a amostra 10μL ácida nucleica, o controle negativo e o controle positivo aos tubos acima do PCR respectivamente. Tampe os tubos firmemente e o centrifugador em 6,000rpm para 10s e então o transporte à zona da amplificação do PCR.
* precaução: Adicionar amostras na seguinte ordem é
recomendou: amostra ácida nucleica do control-> negativo - > controle positivo.
 

4. Amplificação do PCR (zona da amplificação do PCR)
4,1 põe os tubos caped do PCR na máquina do PCR do tempo real para a amplificação.
4,2 ajuste da condição do ciclo do PCR da fluorescência

Recolha sinais fluorescentes no ℃ do 3:60 da etapa; 35s para ABI 7500, 20s para SLAN-96S/96P, quando 13s para outros sistemas do PCR do tempo real. O volume total: 25μL.

4,3 eliminação após a detecção
Dispõe os tubos do PCR em um saco selado após a reação e trate os tubos usados como desperdícios médicos.
 

5. Ajustes para a análise do resultado
Ajuste a linha de base em uma região antes da amplificação exponencial onde os sinais fluorescentes de todas as amostras são relativamente estáveis (nenhumas flutuações significativas em todas as amostras); ajuste o ponto de partida (número de ciclo) longe das flutuações do sinal em começar
fase de coleção da fluorescência; ajuste o valor-limite (número de ciclo) 1~3 ciclos antes do Ct da primeira amostra para incorporar a amplificação exponencial. 4~15 ciclos são recomendados.
Ajuste o direito do ponto inicial acima do ponto o mais alto da curva negativa da amplificação do controle (curva irregular do ruído).
 

6. Critérios do controle da qualidade
Antes de avaliar os resultados do espécime, o controle positivo e o controle negativo devem ser interpretados usando a tabela da interpretação abaixo, e o controle positivo e a curva negativa do controle devem ser executados corretamente, se não o resultado da amostra é inválido.

7. Interpretação dos resultados da análise
Os canais para o vírus de Monkeypox, resultado de FAM da detecção devem ser interpretados como abaixo.
a) positivo: O ≤ 38 do Ct e a curva da amplificação S-são dados forma.
b) suspeitou: 38 < Ct=""> 40 ou ≤ nulo 35 do Ct e do Ct no canal de VIC para o segundo teste.
c) negativo: Ct > 40 ou ≤ nulo 35 do Ct e do Ct no canal de VIC.
d) contraprova: Ct > 40 ou Ct nulo e Ct > 35 no canal de VIC.