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Teste do Thyroxine T4 ELISA, preciso alta, método do sanduíche de Elisa, para a medida quantitativa
Nome do produto: Teste do Thyroxine T4 ELISA
Uso pretendido:
O jogo de (T4) do Thyroxine é projetado medir quantitativamente o presente T4 no soro, no plasma (o EDTA e heparina), na urina, em amostras fecais secadas extraídas, e em culturemedia do tecido. Este jogo mede totalT4 no soro, no plasma, e em amostras fecais extraídas. T4 é independente da espécie.
Sumário:
O Thyroxine é a hormona principal produzida pela glndula de tiroide. As hormonas de tiroide, o triiodothyronine (T3) e o thyroxine (T4), so as hormonas tirosina-baseadas produzidas pela glndula de tiroide que so principal responsável para o regulamento do metabolismo. O iodo é necessário para a produço de T3 e de T4. Uma deficiência do iodo conduz produço diminuída de T3 e de T4, amplia o tecido do tiroide e causará a doença conhecida como o bócio. O formulário principal da hormona de tiroide no sangue é o thyroxine (T4), que tem uma meia-vida mais longa do que o T3. A relaço de T4 ao T3 liberado no sangue é aproximadamente 20 a 1. T4 é convertida ao T3 ativo (três a quatro vezes mais poderoso do que T4) dentro das pilhas pelos deiodinases (5' - iodinase). Estes so processados mais pelo decarboxylation e pelo deiodination para produzir o iodothyronamine (T1a) e o thyronamine (T0a). Todos os três isoforms dos deiodinases selênio-esto contendo enzimas, assim o selênio dietético é essencial para a produço T3. O hipotiroidismo é a circunstncia que resulta da sob-produço de thyroxine pela glndula de tiroide qualquer um porque a glndula é naturalmente underactive ou porque a terapia ou a cirurgia do radioiodine para uma glndula overactive conduziram hipoactividade. O Thyroxine é tomado para substituir a deficiência que existe em tais situações e consequentemente para restaurar a atividade metabólica normal. A produço da hormona de tiroide é regulada através da modulaço pituitária de (TSH) do thyrotropin da secreço do prohormone de (T4) do thyroxine pela glndula de tiroide e pelo regulamento da produço ativa de (T3) do triiodothyronine em tecidos periféricos através dos eventos metabólicos que influenciam a enzima.
Princípio de teste:
O jogo oferece 2 escalas padro da curva. Para amostras do soro e do plasma, nós recomendamos usar o µL 10 dos padrões ou das amostras. A escala de concentraço do ensaio para T4 será 50 ng/ml a 0,781 ng/ml. Para amostras de urina, nós recomendamos alternativamente usar o µL 100 dos padrões ou provamos concentrações de T4 que variam de 4 ng/ml a 0,0625 ng/ml.
Uma soluço T4 conservada em estoque é fornecida para gerar curvas padro para o ensaio e todas as amostras devem ser lidas fora da curva padro. Os padrões ou as amostras diluídas so introduzidos com pipeta em uma placa de microtiter clara revestida com um anticorpo para capturar anticorpos do rato. Um conjugado de T4-peroxidase é adicionado aos padrões e s amostras nos poços. A reaço obrigatória é iniciada pela adiço de um anticorpo monoclonal toT4 a cada um bem. Depois que uma incubaço da hora a placa é lavada e a carcaça está adicionada. A carcaça reage com o conjugado encadernado de T4-peroxidase. Após uma incubaço curto, a reaço é parada e a intensidade da cor gerada é detectada em um leitor da placa de microtiter capaz de medir o comprimento de onda 450nm. A concentraço do T4 na amostra é calculada, após ter feito a correço apropriada para a diluiço da amostra, usando o software disponível com a maioria de leitores da placa.
Componentes do jogo
* contém 0.03% ProClin 300
** contém 0.03% ProClin sulfato da gentamicina de 300 + de 0.01%
o *** contém 0.03% ProClin 300 + 0.015% 5 bromo-5-nitro-1,3-dioxane (BND) + 0.010% 2 methyl-2H-isothiazol-3-one (o MIT)
PROCEDIMENTO DE ENSAIO
Cada um corrido deve incluir uma curva padro.
1. Fixe o número desejado de poços do Microtiter no suporte do quadro.
2. Dispense o µL 10 de cada padro, controle e amostras com pontas descartáveis novas em poços apropriados.
3. Incube por 5 minutos na temperatura ambiente (18 °C – °C) 25.
4. Dispense o conjugado da enzima de 100 µL em cada um bem.
Misture completamente por 10 segundos. É importante ter uma mistura completa nesta etapa.
5. Incube por 80 minutos na temperatura ambiente (18 °C – °C) 25.
6. Agite vivamente para fora os índices dos poços.
Enxáge os poços 5 vezes com soluço diluída da lavagem (µL 400 pelo poço). Golpeie os poços agudamente no papel absorvente para remover as gotas residuais.
Nota importante:
A sensibilidade e a preciso deste ensaio so influenciadas marcadamente pelo desempenho correto do procedimento de lavagem!
1. Adicione o µL 100 da soluço da carcaça a cada um bem.
2. Incube por 10 minutos na temperatura ambiente (18 o °C – °C) 25 incube por 7 minutos na temperatura ambiente (°C 26 – o °C) 29 incuba por 5 minutos na temperatura ambiente (mais °C) de 29
3. Pare a reaço enzimático adicionando 100 que o µL de para a soluço a cada um bem.
4. Determine a absorvência (OD) de cada um bem 450 no ± 10 nanômetro com um leitor da placa de microtiter.
Recomenda-se que os poços estejam lidos dentro de 10 minutos após ter adicionado a soluço da parada.
CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO
1 alcance dinmico do ensaio
A escala do ensaio está entre 8,0 – 250 nmol/L.
Sensibilidade 2
A sensibilidade analítica do Thyroxine total (T4) ELISA foi calculada subtraindo 2 desvios padro do meio de 20 análises replicate do padro 0 (S0) e encontrada para ser 8,0 nmol/L.
Reprodutibilidade 3
Ensaio intra
A variabilidade do ensaio é mostrada dentro abaixo:
Amostra | n | Meio (nmol/L) | CV (%) |
1 | 24 | 103,7 | 3,4 |
2 | 24 | 145,7 | 2,5 |
3 | 24 | 194,4 | 5,6 |
Ensaio inter
A variabilidade do ensaio é mostrada no meio abaixo:
Amostra | n | Meio (nmol/L) | CV (%) |
1 | 10 | 73,4 | 4,9 |
2 | 10 | 136,3 | 5,4 |
3 | 10 | 200,9 | 8,1 |
As amostras foram cravadas adicionando as soluções T4 com concentrações conhecidas em uma relaço do 1:1.
% recuperaço tem sido calculado por multiplicaço de relaço de medida e esperado valor com 100 (esperado valor = (endógeno T4 + T4) adicionado/2; devido a uma diluiço do 1:2 do soro com material do ponto).
Amostra 1 | Amostra 2 | Amostra 3 | |||||||
Concentraço [nmol/L] | 79,7 | 42,8 | 115,0 | ||||||
Recuperaço média [%] | 102,0 | 99,3 | 105,5 | ||||||
Escala da recuperaço [%] | de | 96,5 | 97,0 | 103,9 | |||||
a | 106,6 | 101,6 | 107,3 | ||||||
VIDA NOVA CO. MÉDICO DE ORIENTE, LTD. | |
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