Uso alto personalizado da pesquisa do jogo de Adiponectin ELISA do ser humano da sensibilidade

Número de modelo:Cat.No E1550Hu
Lugar de origem:Xangai, China.
Quantidade de ordem mínima:negociação
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Poços altos do jogo 96 de Adiponectin ELISA do ser humano da especificidade e da sensibilidade
 
Cat.No EHu1550
Tamanho: 96 poços
Armazenamento: Armazene os reagentes em 2-8°C. para um armazenamento de mais de 6 meses referem a data de validade mantêm-no em ciclos repetidos Avoid da aproximaço amigável de -20°C. Se os reagentes individuais so abertos recomenda-se que o jogo esteja usado dentro de 1 mês.
* este produto é para o uso da pesquisa somente, no para o uso em procedimentos do diagnóstico. É recomenda altamente ler inteiramente antes de usar esta instruço.
 
Uso pretendido
Este jogo do sanduíche é para a detecço quantitativa exata de ser humano Adiponectin (igualmente conhecido como o ADP) no soro, plasma, supernates da cultura celular, lysates da pilha, homogenates do tecido.
 
Preciso
A preciso do Intra-ensaio (preciso dentro de um ensaio) três amostras de concentraço conhecida foi testada em uma placa para avaliar a preciso do intra-ensaio.
A preciso do Inter-ensaio (preciso entre ensaios) três amostras de concentraço conhecida foi testada em ensaios separados para avaliar a preciso do inter-ensaio.
CV (%) = SD/mean x 100
Intra-ensaio: CV<8>
Inter-ensaio: CV<10>
 
Coleço de espécime
O soro permite que o soro coagule por 10-20 minutos na temperatura ambiente. Centrifugador em 2000-3000 RPM por 20 minutos.
O plasma recolhe o plasma usando o EDTA ou a heparina como um anticoagulante. Centrifugue amostras por 15 minutos em 2000-3000 RPM em 2 - 8°C dentro de 30 minutos da coleço.
A urina recolhe pelo tubo estéril. Centrifugador em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Ao recolher o líquido fluido e cerebrospinal pleuroperitoneal, siga por favor os procedimentos acima mencionados.
O Supernatant da cultura celular recolhe pelos tubos estéreis ao examinar segregue componentes. Centrifugue em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Recolha os supernatants com cuidado. Ao examinar os componentes dentro da pilha, use PBS (pH 7.2-7.4) para diluir a suspenso da pilha concentraço da pilha de aproximadamente 1 million/ml. Danifique pilhas através dos ciclos repetidos da gelo-aproximaço amigável para deixar para fora os componentes internos. Centrifugue em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
Tecidos da lavagem do tecido em PBS (pH 7,4) para remover completamente o sangue adicional e a pesá-lo antes da homogeneizaço. Triture tecidos e homogeneize-os em PBS (pH7.4) com um homogenizador de vidro no gelo. Aproximaço amigável em 2-8°C ou gelo no centrifugador de -20°C. em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
 
Nota

  • As concentrações da amostra devem ser previstas antes de ser usada no ensaio. Se a concentraço da amostra no está dentro da escala da curva padro, os usuários devem contactar-nos para determinar a amostra ótima para suas experiências particulares.

  • As amostras a ser usadas no prazo de 5 dias devem ser armazenadas nas amostras 2-8°C. devem ser aliquoted ou devem ser armazenadas em -20°C dentro de 1 mês ou em -80°C dentro de 6 meses. Avoid repetiu ciclos da aproximaço amigável do gelo.

  • As amostras devem ser trazidas temperatura ambiente antes de começar o ensaio.

  • Centrifugador para recolher antes de usar a amostra.

  • As amostras que contêm NaN3 no podem ser testadas enquanto inibe a atividade da peroxidase (HRP) do rabanete de cavalo.

  • Recolha os supernatants com cuidado. Quando os sedimentos ocorreram durante o armazenamento, a centrifugaço deve ser executada outra vez.

o *Sample no pode ser diluído com este jogo. Devido o ao material nós usamo-nos para preparar o jogo, a interferência de matriz da amostra pode falsamente comprimir a especificidade e a preciso do ensaio.
 
Preparaço do reagente
O padro reconstitui o 120μl do padro (64mg/L) com o 120μl do diluente padro para gerar uma soluço 32mg/L conservada em estoque padro. Permita que o padro sente-se por 15 minutos com agitaço delicada antes de fazer diluições. Prepare pontos padro duplicados em série diluindo a soluço conservada em estoque padro (32mg/L) 1:2 com o diluente padro para produzir as soluções 16mg/l, 8mg/L, 4mg/L e 2mg/L. O diluente padro serve como o padro zero (0 mg/L). Toda a soluço restante deve ser congelada em -20°C e ser usada dentro de um mês. A diluiço das soluções padro sugeridas é como segue:
 

32mg/LPadro No.5diluente original do padro 120μl + do padro 120μl
160mg/LPadro No.4padro 120μl diluente do padro No.5 + 120μl
8mg/LPadro No.3padro 120μl diluente do padro No.4 + 120μl
4mg/LPadro No.2padro 120μl diluente do padro No.3 + 120μl
2mg/LPadro No.1padro 120μl diluente do padro No.2 + 120μl

 
 

Concentraço padroPadro No.5Padro No.4Padro No.3Padro No.2Padro No.1
64mg/L32mg/L16mg/L8mg/L4mg/L2mg/L

 
Amortecedor 20ml diluído da lavagem do concentrado 25x do amortecedor da lavagem no deionized ou água destilada para render 500 ml do amortecedor da lavagem 1x. Se os cristais formaram no concentrado, mistura delicadamente até que os cristais se dissolverem completamente.
 
Sumário

1. Prepare todos os reagentes, amostras e padrões.

2. Adicione a amostra e o reagente de ELISA em cada um bem. Incube para 1 hora em 37°C.

3. Lave a placa 5 vezes.

4. Adicione a soluço A e B. Incubaço da carcaça por 10 minutos em 37°C.

5. Adicione param a soluço e a cor torna-se.

6. Leia o valor do OD dentro de 10 minutos.
 
Referências
Waki H., Yamauchi T., Kamon J., Ito Y., Uchida S., Kita S., Hara K., Hada Y., Vasseur F., Froguel P., Kimura S., Nagai R., Kadowaki T.
J. Biol. Chem. 278:40352- 40363(2003)

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