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Jogo forte do ensaio da especificidade ELISA para o jogo 96 Wells
48 Wells do rato ACV-A ELISA
Cat.No E0792Mo
Escala padro da curva: 10ng/L - 3000ng/L
Sensibilidade: 5.43ng/L
Tamanho: 96 poços
Preciso
A preciso do Intra-ensaio (preciso dentro de um ensaio) três amostras de concentraço conhecida foi testada em uma placa para avaliar a preciso do intra-ensaio.
A preciso do Inter-ensaio (preciso entre ensaios) três amostras de concentraço conhecida foi testada em ensaios separados para avaliar a preciso do inter-ensaio.
CV (%) = SD/mean x 100
Intra-ensaio: CV<8>
Inter-ensaio: CV<10>
Uso pretendido
Este jogo do sanduíche é para a detecço quantitativa exata do rato Activin A (igualmente conhecido como ACV-A) no soro, plasma, supernates da cultura celular, lysates da pilha, homogenates do tecido.
Princípio do ensaio
Este jogo é um ensaio Enzima-ligado da imunoabsorço (ELISA). A placa foi pré-revestida com o anticorpo do rato ACV-A. ACV-A apresentam na amostra so adicionados e ligam aos anticorpos revestidos nos poços. E o anticorpo ento biotinylated do rato ACV-A é adicionado e liga a ACV-A na amostra. Ento Streptavidin-HRP é adicionado e liga ao anticorpo de Biotinylated ACV-A. Após a incubaço Streptavidin-HRP desatado é lavado afastado durante uma etapa de lavagem. A soluço da carcaça é adicionada ento e a cor torna-se em proporço quantidade do rato ACV-A. A reaço é terminada pela adiço de ácido para a soluço e a absorvência é medida em 450 nanômetro.
Material exigido mas no fornecido
Coleço de espécime
O soro permite que o soro coagule por 10-20 minutos na temperatura ambiente. Centrifugador em 2000-3000 RPM por 20 minutos.
O plasma recolhe o plasma usando o EDTA ou a heparina como um anticoagulante. Centrifugue amostras por 15 minutos em 2000-3000 RPM em 2 - 8°C dentro de 30 minutos da coleço.
A urina recolhe pelo tubo estéril. Centrifugador em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Ao recolher o líquido fluido e cerebrospinal pleuroperitoneal, siga por favor os procedimentos acima mencionados.
O Supernatant da cultura celular recolhe pelos tubos estéreis ao examinar segregue componentes. Centrifugue em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Recolha os supernatants com cuidado. Ao examinar os componentes dentro da pilha, use PBS (pH 7.2-7.4) para diluir a suspenso da pilha concentraço da pilha de aproximadamente 1 million/ml. Danifique pilhas através dos ciclos repetidos da gelo-aproximaço amigável para deixar para fora os componentes internos. Centrifugue em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
Tecidos da lavagem do tecido em PBS (pH 7,4) para remover completamente o sangue adicional e a pesá-lo antes da homogeneizaço. Triture tecidos e homogeneize-os em PBS (pH7.4) com um homogenizador de vidro no gelo. Aproximaço amigável em 2-8°C ou gelo no centrifugador de -20°C. em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
Preparaço do reagente
Todos os reagentes devem ser trazidos temperatura ambiente antes de
usar.
O padro reconstitui o 120μl do padro (2.4ng/ml) com o 120μl do diluente padro para gerar uma soluço 1.2ng/ml conservada em estoque padro. Permita que o padro sente-se por 15 minutos com agitaço delicada antes de fazer diluições. Prepare pontos padro duplicados em série diluindo o 1:2 padro da soluço conservada em estoque (1.2ng/ml) com o diluente padro para produzir as soluções 0.6ng/ml, 0.3ng/ml, 0.15ng/ml e 0.075ng/ml. O diluente padro serve como o padro zero (0 ng/ml). Toda a soluço restante deve ser congelada em -20°C e ser usada dentro de um mês. A diluiço das soluções padro sugeridas é como segue:
1600ng/L | Padro No.5 | diluente original do padro 120μl + do padro 120μl |
800ng/L | Padro No.4 | padro 120μl diluente do padro No.5 + 120μl |
400ng/L | Padro No.3 | padro 120μl diluente do padro No.4 + 120μl |
200ng/L | Padro No.2 | padro 120μl diluente do padro No.3 + 120μl |
100ng/L | Padro No.1 | padro 120μl diluente do padro No.2 + 120μl |
Concentraço padro | Padro No.5 | Padro No.4 | Padro No.3 | Padro No.2 | Padro No.1 |
3200ng/L | 1600ng/L | 800ng/L | 400ng/L | 200ng/L | 100ng/L |
Amortecedor 20ml diluído da lavagem do concentrado 30x do amortecedor da lavagem no deionized ou água
destilada para render 500 ml do amortecedor da lavagem 1x. Se os
cristais formaram no concentrado, mistura delicadamente até que os
cristais se dissolverem completamente.
Sumário
1. Prepare todos os reagentes, amostras e padrões.
2. Adicione a amostra e o reagente de ELISA em cada um bem. Incube para 1 hora em 37°C.
3. Lave a placa 5 vezes.
4. Adicione a soluço A e B. Incubaço da carcaça por 10 minutos em 37°C.
5. Adicione param a soluço e a cor torna-se.
6. Leia o valor do OD dentro de 10 minutos.