Jogo encalhado Anti-dobro do ADN DS-DNA ELISA do rato da elevada precisão e da especificidade de 96 Wells

Número de modelo:Cat.No E0139Mo
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Jogo encalhado Anti-dobro do ADN DS-DNA ELISA do rato da elevada preciso e da especificidade de 96 Wells

Cat.No E0139Mo
Escala padro da curva: 0.5ng/ml - 200ng/ml
Sensibilidade: 0.25ng/ml
Tamanho: 96 poços
o produto dos *This é para o uso da pesquisa somente, no para o uso em procedimentos do diagnóstico. Itis recomenda altamente ler inteiramente esta instruço antes do uso.
 
Preciso
A preciso do Intra-ensaio (preciso dentro de um ensaio) três amostras de concentraço conhecida foi testada em uma placa para avaliar a preciso do intra-ensaio.
A preciso do Inter-ensaio (preciso entre ensaios) três amostras de concentraço conhecida foi testada em ensaios separados para avaliar a preciso do inter-ensaio.
CV (%) = SD/mean x 100
Intra-ensaio: CV<8>
Inter-ensaio: CV<10>
 
Princípio do ensaio
Este jogo é um ensaio Enzima-ligado da imunoabsorço (ELISA). A placa foi pré-revestida com o anticorpo do rato DS-DNA. DS-DNA apresentam na amostra so adicionados e ligam aos anticorpos revestidos nos poços. E o anticorpo ento biotinylated do rato DS-DNA é adicionado e liga a DS-DNA na amostra. Ento Streptavidin-HRP é adicionado e liga ao Biotinylated DS-DNAantibody. Após a incubaço Streptavidin-HRP desatado é lavado afastado durante uma etapa de lavagem. A soluço da carcaça é adicionada ento e a cor torna-se em proporço quantidade do rato DS-DNA. A reaço é terminada pela adiço de ácido para a soluço e a absorvência é medida em 450 nanômetro.
 
Reagente fornecido

ComponentesQuantidade
Soluço padro (240ng/ml)0.5ml x1
Placa pré-revestida de ELISA12 * 8 tiras boas x1
Diluente padro3ml x1
Streptavidin-HRP6ml x1
Pare a soluço6ml x1
Soluço A da carcaça6ml x1
Soluço B da carcaça6ml x1
Concentrado do amortecedor da lavagem (30x)20ml x1
Anticorpo do rato DS-DNA de Biotinylated1ml x1
Instruço do usuário1
Aferidor da placapics 2
Saco do zíper1 PIC


Material exigido mas no fornecido

  • Incubadora 37°C±0.5°C
  • Papel absorvente
  • Pipeta da preciso e pontas descartáveis da pipeta
  • Limpe os tubos
  • Deionized ou água destilada
  • Leitor de Microplate com 450 o filtro do comprimento de onda do ± 10nm

 
Coleço de espécime
O soro permite que o soro coagule por 10-20 minutos na temperatura ambiente. Centrifugador em 2000-3000 RPM por 20 minutos.
 
O plasma recolhe o plasma usando o EDTA ou a heparina como um anticoagulante. Centrifugue amostras por 15 minutos em 2000-3000 RPM em 2 - 8°C dentro de 30 minutos da coleço.
 
A urina recolhe pelo tubo estéril. Centrifugador em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Ao recolher o líquido fluido e cerebrospinal pleuroperitoneal, siga por favor os procedimentos acima mencionados.
 
O Supernatant da cultura celular recolhe pelos tubos estéreis ao examinar segregue componentes. Centrifugue em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Recolha os supernatants com cuidado. Ao examinar os componentes dentro da pilha, use PBS (pH 7.2-7.4) para diluir a suspenso da pilha concentraço da pilha de aproximadamente 1 million/ml. Danifique pilhas através dos ciclos repetidos da gelo-aproximaço amigável para deixar para fora os componentes internos. Centrifugue em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
 
Tecidos da lavagem do tecido em PBS (pH 7,4) para remover completamente o sangue adicional e a pesá-lo antes da homogeneizaço. Triture tecidos e homogeneize-os em PBS (pH7.4) com um homogenizador de vidro no gelo. Aproximaço amigável em 2-8°C ou gelo no centrifugador de -20°C. em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
 
o *Sample no pode ser diluído com este jogo. Devido o ao material nós usamo-nos para preparar o jogo, a interferência de matriz da amostra pode falsamente comprimir a especificidade e a preciso do ensaio.
 
Procedimento de ensaio
1. Prepare todos os reagentes, soluções padro e amostras como instruídas. Traga todos os reagentes temperatura ambiente antes de usar. O ensaio é executado na temperatura ambiente.
2. Determine o número de tiras exigidas para o ensaio. Introduza as tiras nos quadros para o uso. As tiras no utilizadas devem ser armazenadas em 2-8°C.
3. Adicione o padro 50μl ao padro bem. Nota: No adicione o anticorpo ao padro bem porque a soluço padro contém o anticorpo biotinylated.
4. Adicione a amostra 40μl aos poços da amostra e ento adicione o anticorpo do anti-DS-ADN 10μl aos poços da amostra, a seguir adicione o streptavidin-HRP 50μl aos poços da amostra e aos poços padro (poço do controle no vazio). Misture bem. Cubra a placa com um aferidor. Incube 60 minutos em 37°C.
5. Remova o aferidor e lave a placa 5 vezes com amortecedor da lavagem. Embeba poços com pelo menos o amortecedor da lavagem de 0,35 ml para 30 segundos a 1 minuto para cada Washington. Para a lavagem automatizada, aspire todos os poços e lave 5 vezes com o amortecedor da lavagem, enchendo em demasia jorra com amortecedor da lavagem. Borre a placa nas toalhas de papel ou no outro material absorvente.
6. Adicione a soluço A da carcaça 50μl a cada um poço e adicione ento a soluço B da carcaça 50μl a cada um bem. Incube a placa coberta com um aferidor novo por 10 minutos em 37°C na obscuridade.
7. Adicione 50μl param a soluço a cada um bem, a cor azul mudará no amarelo imediatamente.
8. Determine a densidade ótica (valor do OD) de cada um poço que usa imediatamente um grupo do leitor do microplate a 450 nanômetro dentro de 10 minuetos após ter adicionado a soluço da parada.
 
Sumário
1. Prepare todos os reagentes, amostras e padrões.
2. Adicione a amostra e o reagente de ELISA em cada um bem. Incube para 1 hora em 37°C.
3. Lave a placa 5 vezes.
4. Adicione a soluço A e B. Incubaço da carcaça por 10 minutos em 37°C.
5. Adicione param a soluço e a cor torna-se.
6. Leia o valor do OD dentro de 10 minutos.
 
Cálculo de resultado
Construa uma curva padro traçando o OD médio para cada padro no vertical (Y) linha central contra a concentraço no horizontal (X) a linha central e tira uma melhor curva do ajuste através dos pontos no gráfico. Estes cálculos podem melhor ser executados com o software por computador do curva-encaixe e a melhor linha do ajuste pode ser determinada pela análise de regresso.

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