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Jogo alto do sanduíche ELISA do óxido nítrico do rato da
sensibilidade e da preciso de 96 Wells
Cat.No E0439Mo
o produto dos *This é para o uso da pesquisa somente, no para o uso em procedimentos do diagnóstico. É recomenda altamente ler inteiramente antes de usar esta instruço.
Uso pretendido
Este jogo do sanduíche é para a detecço quantitativa exata de óxido nítrico do rato (igualmente conhecido como NENHUM) no soro, plasma, supernates da cultura celular, lysates da pilha, homogenates do tecido.
Princípio do ensaio
Este jogo é um ensaio Enzima-ligado da imunoabsorço (ELISA). A placa foi pré-revestida com rato NENHUM anticorpo. NO o presente na amostra é adicionado e liga aos anticorpos revestidos nos poços. E o rato ento biotinylated NENHUM anticorpo é adicionado e liga a NO na amostra. Ento Streptavidin-HRP é adicionado e no liga ao Biotinylated NENHUM anticorpo. Após a incubaço Streptavidin-HRP desatado é lavado afastado durante uma etapa de lavagem. A soluço da carcaça é adicionada ento e a cor torna-se em proporço quantidade de rato NO. A reaço é terminada pela adiço de ácido para a soluço e a absorvência é medida em 450 nanômetro.
Reagente fornecido
Componentes | Quantidade |
Soluço padro (480μmol/L) | 0.5ml x1 |
Placa pré-revestida de ELISA | 12 * 8 tiras boas x1 |
Diluente padro | 3ml x1 |
Streptavidin-HRP | 6ml x1 |
Pare a soluço | 6ml x1 |
Soluço A da carcaça | 6ml x1 |
Soluço B da carcaça | 6ml x1 |
Concentrado do amortecedor da lavagem (30x) | 20ml x1 |
Rato de Biotinylated NENHUM anticorpo | 1ml x1 |
Instruço do usuário | 1 |
Aferidor da placa | pics 2 |
Saco do zíper | 1 PIC |
Coleço de espécime
O soro permite que o soro coagule por 10-20 minutos na temperatura
ambiente. Centrifugador em 2000-3000 RPM por 20 minutos.
O plasma recolhe o plasma usando o EDTA ou a heparina como um
anticoagulante. Centrifugue amostras por 15 minutos em 2000-3000
RPM em 2 - 8°C dentro de 30 minutos da coleço.
A urina recolhe pelo tubo estéril. Centrifugador em 2000-3000 RPM por
aproximadamente 20 minutos. Ao recolher o líquido fluido e
cerebrospinal pleuroperitoneal, siga por favor os procedimentos
acima mencionados.
O Supernatant da cultura celular recolhe pelos tubos estéreis ao examinar segregue componentes.
Centrifugue em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
Recolha os supernatants com cuidado. Ao examinar os componentes
dentro da pilha, use PBS (pH 7.2-7.4) para diluir a suspenso da
pilha concentraço da pilha de aproximadamente 1 million/ml.
Danifique pilhas através dos ciclos repetidos da gelo-aproximaço
amigável para deixar para fora os componentes internos. Centrifugue
em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
Tecidos da lavagem do tecido em PBS (pH 7,4) para remover completamente o sangue adicional e a
pesá-lo antes da homogeneizaço. Triture tecidos e homogeneize-os em
PBS (pH7.4) com um homogenizador de vidro no gelo. Aproximaço
amigável em 2-8°C ou gelo no centrifugador de -20°C. em 2000-3000
RPM por aproximadamente 20 minutos.
Nota
o *Sample no pode ser diluído com este jogo. Devido o ao material nós usamo-nos para preparar o jogo, a interferência de matriz da amostra pode falsamente comprimir a especificidade e a preciso do ensaio.
Preparaço do reagente
Todos os reagentes devem ser trazidos temperatura ambiente antes de usar. O padro reconstitui o 120μl do padro (480μmol/L) com o 120μl do diluente padro para gerar uma soluço 240μmol/L conservada em estoque padro. Permita que o padro sente-se por 15 minutos com agitaço delicada antes de fazer diluições. Prepare pontos padro duplicados em série diluindo a soluço conservada em estoque padro (240μmol/L) 1:2 com o diluente padro para produzir as soluções 120μmol/L, 60μmol/L, 30μmol/L e 15μmol/L. O diluente padro serve como o padro zero (0 μmol/L). Toda a soluço restante deve ser congelada em -20℃ e ser usada dentro de um mês. A diluiço das soluções padro sugeridas é como segue:
240μmol/L | Padro No.5 | diluente original do padro 120μl + do padro 120μl |
120μmol/L | Padro No.4 | padro 120μl diluente do padro No.5 + 120μl |
60μmol/L | Padro No.3 | padro 120μl diluente do padro No.4 + 120μl |
30μmol/L | Padro No.2 | padro 120μl diluente do padro No.3 + 120μl |
15μmol/L | Padro No.1 | padro 120μl diluente do padro No.2 + 120μl |
Concentraço padro | Padro No.5 | Padro No.4 | Padro No.3 | Padro No.2 | Padro No.1 |
480μmol/L | 240μmol/L | 120μmol/L | 60μmol/L | 30μmol/L | 15μmol/L |
Amortecedor 20ml diluído da lavagem do concentrado 30x do amortecedor da lavagem no deionized ou água destilada para render 500 ml do amortecedor da lavagem 1x. Se os cristais formaram no concentrado, mistura delicadamente até que os cristais se dissolverem completamente.