Sensibilidade do jogo de Elisa do sanduíche do óxido nítrico/precisão altas 96 Wells

Número de modelo:Cat.No E0439Mo
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Jogo alto do sanduíche ELISA do óxido nítrico do rato da sensibilidade e da preciso de 96 Wells

Cat.No E0439Mo

o produto dos *This é para o uso da pesquisa somente, no para o uso em procedimentos do diagnóstico. É recomenda altamente ler inteiramente antes de usar esta instruço.

 

Uso pretendido

Este jogo do sanduíche é para a detecço quantitativa exata de óxido nítrico do rato (igualmente conhecido como NENHUM) no soro, plasma, supernates da cultura celular, lysates da pilha, homogenates do tecido.

 

Princípio do ensaio

Este jogo é um ensaio Enzima-ligado da imunoabsorço (ELISA). A placa foi pré-revestida com rato NENHUM anticorpo. NO o presente na amostra é adicionado e liga aos anticorpos revestidos nos poços. E o rato ento biotinylated NENHUM anticorpo é adicionado e liga a NO na amostra. Ento Streptavidin-HRP é adicionado e no liga ao Biotinylated NENHUM anticorpo. Após a incubaço Streptavidin-HRP desatado é lavado afastado durante uma etapa de lavagem. A soluço da carcaça é adicionada ento e a cor torna-se em proporço quantidade de rato NO. A reaço é terminada pela adiço de ácido para a soluço e a absorvência é medida em 450 nanômetro.

 

Reagente fornecido

ComponentesQuantidade
Soluço padro (480μmol/L)0.5ml x1
Placa pré-revestida de ELISA12 * 8 tiras boas x1
Diluente padro3ml x1
Streptavidin-HRP6ml x1
Pare a soluço6ml x1
Soluço A da carcaça6ml x1
Soluço B da carcaça6ml x1
Concentrado do amortecedor da lavagem (30x)20ml x1
Rato de Biotinylated NENHUM anticorpo1ml x1
Instruço do usuário1
Aferidor da placapics 2
Saco do zíper1 PIC

 

Coleço de espécime
O soro permite que o soro coagule por 10-20 minutos na temperatura ambiente. Centrifugador em 2000-3000 RPM por 20 minutos.
 
O plasma recolhe o plasma usando o EDTA ou a heparina como um anticoagulante. Centrifugue amostras por 15 minutos em 2000-3000 RPM em 2 - 8°C dentro de 30 minutos da coleço.
 
A urina recolhe pelo tubo estéril. Centrifugador em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Ao recolher o líquido fluido e cerebrospinal pleuroperitoneal, siga por favor os procedimentos acima mencionados.
 
O Supernatant da cultura celular recolhe pelos tubos estéreis ao examinar segregue componentes. Centrifugue em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Recolha os supernatants com cuidado. Ao examinar os componentes dentro da pilha, use PBS (pH 7.2-7.4) para diluir a suspenso da pilha concentraço da pilha de aproximadamente 1 million/ml. Danifique pilhas através dos ciclos repetidos da gelo-aproximaço amigável para deixar para fora os componentes internos. Centrifugue em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
 
Tecidos da lavagem do tecido em PBS (pH 7,4) para remover completamente o sangue adicional e a pesá-lo antes da homogeneizaço. Triture tecidos e homogeneize-os em PBS (pH7.4) com um homogenizador de vidro no gelo. Aproximaço amigável em 2-8°C ou gelo no centrifugador de -20°C. em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.

 

Nota

  • As concentrações da amostra devem ser previstas antes de ser usada no ensaio. Se a concentraço da amostra no está dentro da escala da curva padro, os usuários devem contactar-nos para determinar a amostra ótima para suas experiências particulares.
  • As amostras a ser usadas no prazo de 5 dias devem ser armazenadas nas amostras 2-8°C. devem ser aliquoted ou devem ser armazenadas em -20°C dentro de 1 mês ou em -80°C dentro de 6 meses. Avoid repetiu ciclos da aproximaço amigável do gelo.
  • As amostras devem ser trazidas temperatura ambiente antes de começar o ensaio.
  • Centrifugador para recolher antes de usar a amostra.
  • As amostras que contêm NaN3 no podem ser testadas enquanto inibe a atividade da peroxidase (HRP) do rabanete de cavalo.
  • Recolha os supernatants com cuidado. Quando os sedimentos ocorreram durante o armazenamento, a centrifugaço deve ser executada outra vez.
  • A hemólise pode extremamente impactar a validez dos resultados da análise. Ciao para minimizar a hemólise.

o *Sample no pode ser diluído com este jogo. Devido o ao material nós usamo-nos para preparar o jogo, a interferência de matriz da amostra pode falsamente comprimir a especificidade e a preciso do ensaio.

 

Preparaço do reagente

Todos os reagentes devem ser trazidos temperatura ambiente antes de usar. O padro reconstitui o 120μl do padro (480μmol/L) com o 120μl do diluente padro para gerar uma soluço 240μmol/L conservada em estoque padro. Permita que o padro sente-se por 15 minutos com agitaço delicada antes de fazer diluições. Prepare pontos padro duplicados em série diluindo a soluço conservada em estoque padro (240μmol/L) 1:2 com o diluente padro para produzir as soluções 120μmol/L, 60μmol/L, 30μmol/L e 15μmol/L. O diluente padro serve como o padro zero (0 μmol/L). Toda a soluço restante deve ser congelada em -20℃ e ser usada dentro de um mês. A diluiço das soluções padro sugeridas é como segue:

 

240μmol/LPadro No.5diluente original do padro 120μl + do padro 120μl
120μmol/LPadro No.4padro 120μl diluente do padro No.5 + 120μl
60μmol/LPadro No.3padro 120μl diluente do padro No.4 + 120μl
30μmol/LPadro No.2padro 120μl diluente do padro No.3 + 120μl
15μmol/LPadro No.1padro 120μl diluente do padro No.2 + 120μl

 

Concentraço padroPadro No.5Padro No.4Padro No.3Padro No.2Padro No.1
480μmol/L240μmol/L120μmol/L60μmol/L30μmol/L15μmol/L

 

Amortecedor 20ml diluído da lavagem do concentrado 30x do amortecedor da lavagem no deionized ou água destilada para render 500 ml do amortecedor da lavagem 1x. Se os cristais formaram no concentrado, mistura delicadamente até que os cristais se dissolverem completamente.

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Sensibilidade do jogo de Elisa do sanduíche do óxido nítrico/precisão altas 96 Wells

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