Especificidade alta do jogo de Elisa do rato do sanduíche para a imunoglobulina Secretory A

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Imunoglobulina Secretory alta da especificidade e da sensibilidade do rato um o jogo de SIgA ELISA

 

Uso pretendido

Este jogo do sanduíche é para a detecço quantitativa exata da imunoglobulina Secretory A do rato (igualmente conhecido como o sIgA) no soro, plasma, supernates da cultura celular, lysates da pilha, homogenates do tecido.

 

Princípio do ensaio

Este jogo é um ensaio Enzima-ligado da imunoabsorço (ELISA). A placa foi pré-revestida com o anticorpo do sIgA do rato. o sIgA atual na amostra é adicionado e liga aos anticorpos revestidos nos poços. E o anticorpo ento biotinylated do sIgA do rato é adicionado e liga ao sIgA na amostra. Ento Streptavidin-HRP é adicionado e liga ao anticorpo do sIgA de Biotinylated. Após a incubaço Streptavidin-HRP desatado é lavado afastado durante uma etapa de lavagem. A soluço da carcaça é adicionada ento e a cor torna-se em proporço quantidade de sIgA do rato. A reaço é terminada pela adiço de ácido para a soluço e a absorvência é medida em 450 nanômetro.

 

Reagente fornecido

ComponentesQuantidade
Soluço padro (64μg/ml)0.5ml x1
Placa pré-revestida de ELISA12 * 8 tiras boas x1
Diluente padro3ml x1
Streptavidin-HRP6ml x1
Pare a soluço6ml x1
Soluço A da carcaça6ml x1
Soluço B da carcaça6ml x1
Concentrado do amortecedor da lavagem (30x)20ml x1
Anticorpo do sIgA do rato de Biotinylated1ml x1
Instruço do usuário1
Aferidor da placapics 2
Saco do zíper1 PIC

 

Precauções

  • Antes do uso, o jogo e a amostra devem ser aquecidos naturalmente temperatura ambiente 30 minutos.
  • Esta instruço deve restritamente ser seguida na experiência.
  • Uma vez que o número desejado de tiras foi removido, reseal imediatamente o saco para proteger permanecer da deterioraço. Cubra todos os reagentes quando no no uso.
  • Make sure que introduz com pipeta a ordem e a taxa de adiço de bem-a-bem ao introduzir com pipeta reagentes.
  • A pipeta derruba e o aferidor da placa disposiço deve ser limpo e descartável para evitar a contaminaço colateral.
  • Evite usar os reagentes dos grupos diferentes junto.
  • A soluço B da carcaça é sensível luz, no expõe a soluço B da carcaça para iluminar-se por muito tempo.
  • Pare a soluço contém o ácido. Vista por favor a proteço do olho, da mo e de pele ao usar este material. Evite o contato da pele ou das mucosas com reagente do jogo.
  • O jogo no deve ser usado além da data de validade.

 

Preparaço do reagente

Todos os reagentes devem ser trazidos temperatura ambiente antes de usar.

O padro reconstitui o 120μl do padro (64μg/ml) com o 120μl do diluente padro para gerar uma soluço 32μg/ml conservada em estoque padro. Permita que o padro sente-se por 15 minutos com agitaço delicada antes de fazer diluições. Prepare pontos padro duplicados em série diluindo o 1:2 padro da soluço conservada em estoque (32μg/ml) com o diluente padro para produzir as soluções 16μg/ml, 8μg/ml, 4μg/ml e 2μg/ml. O diluente padro serve como o padro zero (0 μg/ml). Toda a soluço restante deve ser congelada em -20°C e ser usada dentro de um mês. A diluiço das soluções padro sugeridas é como segue:

 

32μg/mlPadro No.5diluente original do padro 120μl + do padro 120μl
16μg/mlPadro No.4padro 120μl diluente do padro No.5 + 120μl
8μg/mlPadro No.3padro 120μl diluente do padro No.4 + 120μl
4μg/mlPadro No.2padro 120μl diluente do padro No.3 + 120μl
2μg/mlPadro No.1padro 120μl diluente do padro No.2 + 120μl

 

Concentraço padroPadro No.5Padro No.4Padro No.3Padro No.2Padro No.1
64μg/ml32μg/ml16μg/ml8μg/ml4μg/ml2μg/ml

 

Amortecedor 20ml diluído da lavagem do concentrado 30x do amortecedor da lavagem no deionized ou água destilada para render 500 ml do amortecedor da lavagem 1x. Se os cristais formaram no concentrado, mistura delicadamente até que os cristais se dissolverem completamente.

 

Procedimento de ensaio

1. Prepare todos os reagentes, soluções padro e amostras como instruídas. Traga todos os reagentes temperatura ambiente antes de usar. O ensaio é executado na temperatura ambiente.

2. Determine o número de tiras exigidas para o ensaio. Introduza as tiras nos quadros para o uso. As tiras no utilizadas devem ser armazenadas em 2-8°C.

3. Adicione o padro 50μl ao padro bem. Nota: No adicione o anticorpo ao padro bem porque a soluço padro contém o anticorpo biotinylated.

4. Adicione a amostra 40μl aos poços da amostra e ento adicione o anti-sIgA anticorpo 10μl aos poços da amostra, a seguir adicione o streptavidin-HRP 50μl aos poços da amostra e aos poços padro (poço do controle no vazio). Misture bem. Cubra a placa com um aferidor. Incube 60 minutos em 37°C.

5. Remova o aferidor e lave a placa 5 vezes com amortecedor da lavagem. Embeba poços com pelo menos o amortecedor da lavagem de 0,35 ml para 30 segundos a 1 minuto para cada Washington. Para a lavagem automatizada, aspire todos os poços e lave 5 vezes com o amortecedor da lavagem, enchendo em demasia jorra com amortecedor da lavagem. Borre a placa nas toalhas de papel ou no outro material absorvente.

6. Adicione a soluço A da carcaça 50μl a cada um poço e adicione ento a soluço B da carcaça 50μl a cada um bem. Incube a placa coberta com um aferidor novo por 10 minutos em 37°C na obscuridade.

7. Adicione 50μl param a soluço a cada um bem, a cor azul mudará no amarelo imediatamente.

8. Determine a densidade ótica (valor do OD) de cada um poço que usa imediatamente um grupo do leitor do microplate a 450 nanômetro dentro de 10 minuetos após ter adicionado a soluço da parada.

 

Cálculo de resultado

Construa uma curva padro traçando o OD médio para cada padro no vertical (Y) linha central contra a concentraço no horizontal (X) a linha central e tira uma melhor curva do ajuste através dos pontos no gráfico. Estes cálculos podem melhor ser executados com o software por computador do curva-encaixe e a melhor linha do ajuste pode ser determinada pela análise de regresso.

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Especificidade alta do jogo de Elisa do rato do sanduíche para a imunoglobulina Secretory A

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