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96 jogo Endothelial vascular personalizado Wells do fator de
crescimento ELISA da pilha do rato
Cat.No E0114Mo
Escala padro da curva: 5ng/L - 1800ng/L
Sensibilidade: 2.48ng/L
Tamanho: 96 poços
Uso pretendido
Este jogo do sanduíche é para a detecço quantitativa exata de fator
de crescimento Endothelial vascular da pilha do rato (igualmente
conhecido como VEGF) no soro, plasma, supernates da cultura
celular, lysates da pilha, homogenates do tecido.
Princípio do ensaio
Este jogo é um ensaio Enzima-ligado da imunoabsorço (ELISA). A
placa foi pré-revestida com o anticorpo do rato VEGF. VEGF
apresentam na amostra so adicionados e ligam aos anticorpos
revestidos nos poços. E o anticorpo ento biotinylated do rato VEGF
é adicionado e liga a VEGF na amostra. Ento Streptavidin-HRP é
adicionado e liga ao anticorpo de Biotinylated VEGF. Após a
incubaço Streptavidin-HRP desatado é lavado afastado durante uma
etapa de lavagem. A soluço da carcaça é adicionada ento e a cor
torna-se em proporço quantidade do rato VEGF. A reaço é terminada
pela adiço de ácido para a soluço e a absorvência é medida em 450
nanômetro.
Precauções
Coleço de espécime
O soro permite que o soro coagule por 10-20 minutos na temperatura
ambiente. Centrifugador em 2000-3000 RPM por 20 minutos.
O plasma recolhe o plasma usando o EDTA ou a heparina como um
anticoagulante. Centrifugue amostras por 15 minutos em 2000-3000
RPM em 2 - 8°C dentro de 30 minutos da coleço.
A urina recolhe pelo tubo estéril. Centrifugador em 2000-3000 RPM por
aproximadamente 20 minutos. Ao recolher o líquido fluido e
cerebrospinal pleuroperitoneal, siga por favor os procedimentos
acima mencionados.
O Supernatant da cultura celular recolhe pelos tubos estéreis ao examinar segregue componentes.
Centrifugue em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
Recolha os supernatants com cuidado. Ao examinar os componentes
dentro da pilha, use PBS (pH 7.2-7.4) para diluir a suspenso da
pilha concentraço da pilha de aproximadamente 1 million/ml.
Danifique pilhas através dos ciclos repetidos da gelo-aproximaço
amigável para deixar para fora os componentes internos. Centrifugue
em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
Tecidos da lavagem do tecido em PBS (pH 7,4) para remover completamente o sangue adicional e a
pesá-lo antes da homogeneizaço. Triture tecidos e homogeneize-os em
PBS (pH7.4) com um homogenizador de vidro no gelo. Aproximaço
amigável em 2-8°C ou gelo no centrifugador de -20°C. em 2000-3000
RPM por aproximadamente 20 minutos.
o *Sample no pode ser diluído com este jogo. Devido o ao material
nós usamo-nos para preparar o jogo, a interferência de matriz da
amostra pode falsamente comprimir a especificidade e a preciso do
ensaio.
Preparaço do reagente
Todos os reagentes devem ser trazidos temperatura ambiente antes de
usar.
O padro reconstitui o 120μl do padro (2000ng/L) com o 120μl do diluente
padro para gerar uma soluço 1000ng/L conservada em estoque padro.
Permita que o padro sente-se por 15 minutos com agitaço delicada
antes de fazer diluições. Prepare pontos padro duplicados em série
diluindo a soluço conservada em estoque padro (1000ng/L) 1:2 com o
diluente padro para produzir as soluções 500ng/L, 250ng/L, 125ng/L
e 62.5ng/L. O diluente padro serve como o padro zero (0 ng/L). Toda
a soluço restante deve ser congelada em -20°C e ser usada dentro de
um mês. A diluiço das soluções padro sugeridas é como segue:
1000ng/L | Padro No.5 | diluente original do padro 120μl + do padro 120μl |
500ng/L | Padro No.4 | padro 120μl diluente do padro No.5 + 120μl |
250ng/L | Padro No.3 | padro 120μl diluente do padro No.4 + 120μl |
125ng/L | Padro No.2 | padro 120μl diluente do padro No.3 + 120μl |
62.5ng/L | Padro No.1 | padro 120μl diluente do padro No.2 + 120μl |
Concentraço padro | Padro No.5 | Padro No.4 | Padro No.3 | Padro No.2 | Padro No.1 |
2000ng/L | 1000ng/L | 500ng/L | 250ng/L | 125ng/L | 62.5ng/L |
Amortecedor 20ml diluído da lavagem do concentrado 30x do amortecedor da lavagem no deionized ou água
destilada para render 500 ml do amortecedor da lavagem 1x. Se os
cristais formaram no concentrado, mistura delicadamente até que os
cristais se dissolverem completamente.
Sumário
1. Prepare todos os reagentes, amostras e padrões.
2. Adicione a amostra e o reagente de ELISA em cada um bem. Incube
para 1 hora em 37°C.
3. Lave a placa 5 vezes.
4. Adicione a soluço A e B. Incubaço da carcaça por 10 minutos em
37°C.
5. Adicione param a soluço e a cor torna-se.
6. Leia o valor do OD dentro de 10 minutos.
Cálculo de resultado
Construa uma curva padro traçando o OD médio para cada padro no
vertical (Y) linha central contra a concentraço no horizontal (X) a
linha central e tira uma melhor curva do ajuste através dos pontos
no gráfico. Estes cálculos podem melhor ser executados com o
software por computador do curva-encaixe e a melhor linha do ajuste
pode ser determinada pela análise de regresso.