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Jogo de Wells FTA ELISA do rato 96 da elevada preciso e da
especificidade para a detecço quantitativa exata
Cat.No E1070Ra
Escala padro da curva: 0.05mmol/L - 10mmol/L
Sensibilidade: 0.021mmol/L
Princípio do ensaio
Este jogo é um ensaio Enzima-ligado da imunoabsorço (ELISA). A
placa foi pré-revestida com o anticorpo do FTA do rato. O FTA
apresenta na amostra é adicionado e liga aos anticorpos revestidos
nos poços. E o anticorpo ento biotinylated do FTA do rato é
adicionado e liga ao FTA na amostra. Ento Streptavidin-HRP é
adicionado e liga ao anticorpo de Biotinylated FTA. Após a incubaço
Streptavidin-HRP desatado é lavado afastado durante uma etapa de
lavagem. A soluço da carcaça é adicionada ento e a cor torna-se em
proporço quantidade do rato FTA. A reaço é terminada pela adiço de
ácido para a soluço e a absorvência é medida em 450 nanômetro.
Reagente fornecido
Componentes | Quantidade |
Soluço padro (14.4mmol/L) | 0.5ml x1 |
Placa pré-revestida de ELISA | 12 * 8 tiras boas x1 |
Diluente padro | 3ml x1 |
Streptavidin-HRP | 6ml x1 |
Pare a soluço | 6ml x1 |
Soluço A da carcaça | 6ml x1 |
Soluço B da carcaça | 6ml x1 |
Concentrado do amortecedor da lavagem (30x) | 20ml x1 |
Anticorpo do FTA do rato de Biotinylated | 1ml x1 |
Instruço do usuário | 1 |
Aferidor da placa | pics 2 |
Saco do zíper | 1 PIC |
Preparaço do reagente
Todos os reagentes devem ser trazidos temperatura ambiente antes de
usar.
O padro reconstitui o 120μl do padro (14.4mmol/L) com o 120μl do diluente
padro para gerar uma soluço 7.2mmol/L conservada em estoque padro.
Permita que o padro sente-se por 15 minutos com agitaço delicada
antes de fazer diluições. Prepare pontos padro duplicados em série
diluindo a soluço conservada em estoque padro (7.2mmol/L) 1:2 com o
diluente padro para produzir as soluções 3.6mmol/L, 1.8mmol/L,
0.9mmol/L e 0.45mmol/L. O diluente padro serve como o padro zero (0
mmol/L). Toda a soluço restante deve ser congelada em -20°C e ser
usada dentro de um mês. A diluiço das soluções padro sugeridas é
como segue:
7.2mmol/L | Padro No.5 | diluente original do padro 120μl + do padro 120μl |
3.6mmol/L | Padro No.4 | padro 120μl diluente do padro No.5 + 120μl |
1.8mmol/L | Padro No.3 | padro 120μl diluente do padro No.4 + 120μl |
0.8mmol/L | Padro No.2 | padro 120μl diluente do padro No.3 + 120μl |
0.4mmol/L | Padro No.1 | padro 120μl diluente do padro No.2 + 120μl |
Concentraço padro | Padro No.5 | Padro No.4 | Padro No.3 | Padro No.2 | Padro No.1 |
14.4mmol/L | 7.2mmol/L | 3.6mmol/L | 1.8mmol/L | 0.9mmol/L | 0.45mmol/L |
Amortecedor 20ml diluído da lavagem do concentrado 30x do amortecedor da lavagem no deionized ou água
destilada para render 500 ml do amortecedor da lavagem 1x. Se os
cristais formaram no concentrado, mistura delicadamente até que os
cristais se dissolverem completamente.
Procedimento de ensaio
1. Prepare todos os reagentes, soluções padro e amostras como
instruídas. Traga todos os reagentes temperatura ambiente antes de
usar. O ensaio é executado na temperatura ambiente.
2. Determine o número de tiras exigidas para o ensaio. Introduza as
tiras nos quadros para o uso. As tiras no utilizadas devem ser
armazenadas em 2-8°C.
3. Adicione o padro 50μl ao padro bem. Nota: No adicione o anticorpo ao padro bem porque a soluço padro contém
o anticorpo biotinylated.
4. Adicione a amostra 40μl aos poços da amostra e ento adicione o
anticorpo de 10μl anti-FTA aos poços da amostra, a seguir adicione
o streptavidin-HRP 50μl aos poços da amostra e aos poços padro
(poço do controle no vazio). Misture bem. Cubra a placa com um
aferidor. Incube 60 minutos em 37°C.
5. Remova o aferidor e lave a placa 5 vezes com amortecedor da
lavagem. Embeba poços com pelo menos o amortecedor da lavagem de
0,35 ml para 30 segundos a 1 minuto para cada Washington. Para a
lavagem automatizada, aspire todos os poços e lave 5 vezes com o
amortecedor da lavagem, enchendo em demasia jorra com amortecedor
da lavagem. Borre a placa nas toalhas de papel ou no outro material
absorvente.
6. Adicione a soluço A da carcaça 50μl a cada um poço e adicione ento
a soluço B da carcaça 50μl a cada um bem. Incube a placa coberta
com um aferidor novo por 10 minutos em 37°C na obscuridade.
7. Adicione 50μl param a soluço a cada um bem, a cor azul mudará no
amarelo imediatamente.
8. Determine a densidade ótica (valor do OD) de cada um poço que usa
imediatamente um grupo do leitor do microplate a 450 nanômetro
dentro de 10 minuetos após ter adicionado a soluço da parada.
Cálculo de resultado
Construa uma curva padro traçando o OD médio para cada padro no
vertical (Y) linha central contra a concentraço no horizontal (X) a
linha central e tira uma melhor curva do ajuste através dos pontos
no gráfico. Estes cálculos podem melhor ser executados com o
software por computador do curva-encaixe e a melhor linha do ajuste
pode ser determinada pela análise de regresso.