

Add to Cart
Do Mannan obrigatório da proteína de Mannma do rato jogo obrigatório personalizado do Lectin MBP MBL ELISA
Ra de Cat.No E0629
Escala padro da curva: 0.5ng/ml - 100ng/ml
Sensibilidade: 0.25ng/ml
Tamanho: 96 poços
Armazenamento: Armazene os reagentes em 2-8°C. para um armazenamento de mais de 6 meses referem a data de validade mantêm-no em ciclos repetidos Avoid da aproximaço amigável de -20°C. Se os reagentes individuais so abertos recomenda-se que o jogo esteja usado dentro de 1 mês.
o produto dos *This é para o uso da pesquisa somente, no para o uso em procedimentos do diagnóstico. É recomenda altamente ler inteiramente antes de usar esta instruço.
Princípio do ensaio
Este jogo é um ensaio Enzima-ligado da imunoabsorço (ELISA). A placa foi pré-revestida com o anticorpo do rato MBP/MBL. MBP/MBL apresentam na amostra so adicionados e ligam aos anticorpos revestidos nos poços. E o anticorpo ento biotinylated do rato MBP/MBL é adicionado e liga a MBP/MBL na amostra. Ento Streptavidin-HRP é adicionado e liga ao anticorpo de Biotinylated MBP/MBL. Após a incubaço Streptavidin-HRP desatado é lavado afastado durante uma etapa de lavagem. A soluço da carcaça é adicionada ento e a cor torna-se em proporço quantidade do rato MBP/MBL. A reaço é terminada pela adiço de ácido para a soluço e a absorvência é medida em 450 nanômetro.
Uso pretendido
Este jogo do sanduíche é para a detecço quantitativa exata da proteína obrigatória de Mannma do rato, Lectin obrigatório do Mannan (igualmente conhecido como MBP/MBL) no soro, plasma, supernates da cultura celular, lysates da pilha, homogenates do tecido.
Precauções
Reagente fornecido
Componentes | Quantidade |
Soluço padro (128ng/ml) | 0.5ml x1 |
Placa pré-revestida de ELISA | 12 * 8 tiras boas x1 |
Diluente padro | 3ml x1 |
Streptavidin-HRP | 6ml x1 |
Pare a soluço | 6ml x1 |
Soluço A da carcaça | 6ml x1 |
Soluço B da carcaça | 6ml x1 |
Concentrado do amortecedor da lavagem (30x) | 20ml x1 |
Anticorpo do rato MBP/MBL de Biotinylated | 1ml x1 |
Instruço do usuário | 1 |
Aferidor da placa | pics 2 |
Saco do zíper | 1 PIC |
Preparaço do reagente
Todos os reagentes devem ser trazidos temperatura ambiente antes de usar.
O padro reconstitui o 120μl do padro (128ng/ml) com o 120μl do diluente padro para gerar uma soluço 64ng/ml conservada em estoque padro. Permita que o padro sente-se por 15 minutos com agitaço delicada antes de fazer diluições. Prepare pontos padro duplicados em série diluindo o 1:2 padro da soluço conservada em estoque (64ng/ml) com o diluente padro para produzir as soluções 32ng/ml, 16ng/ml, 8ng/ml e 4ng/ml. O diluente padro serve como o padro zero (0 ng/ml). Toda a soluço restante deve ser congelada em -20°C e ser usada dentro de um mês. A diluiço das soluções padro sugeridas é como segue:
64ng/ml | Padro No.5 | diluente original do padro 120μl + do padro 120μl |
32ng/ml | Padro No.4 | padro 120μl diluente do padro No.5 + 120μl |
16ng/ml | Padro No.3 | padro 120μl diluente do padro No.4 + 120μl |
8ng/ml | Padro No.2 | padro 120μl diluente do padro No.3 + 120μl |
4ng/ml | Padro No.1 | padro 120μl diluente do padro No.2 + 120μl |
Concentraço padro | Padro No.5 | Padro No.4 | Padro No.3 | Padro No.2 | Padro No.1 |
128ng/ml | 64ng/ml | 32ng/ml | 16ng/ml | 8ng/ml | 4ng/ml |
Amortecedor 20ml diluído da lavagem do concentrado 30x do amortecedor da lavagem no deionized ou água destilada para render 500 ml do amortecedor da lavagem 1x. Se os cristais formaram no concentrado, mistura delicadamente até que os cristais se dissolverem completamente.
Procedimento de ensaio
1. Prepare todos os reagentes, soluções padro e amostras como instruídas. Traga todos os reagentes temperatura ambiente antes de usar. O ensaio é executado na temperatura ambiente.
2. Determine o número de tiras exigidas para o ensaio. Introduza as tiras nos quadros para o uso. As tiras no utilizadas devem ser armazenadas em 2-8°C.
3. Adicione o padro 50μl ao padro bem. Nota: No adicione o anticorpo ao padro bem porque a soluço padro contém o anticorpo biotinylated.
4. Adicione a amostra 40μl aos poços da amostra e ento adicione o anticorpo de 10μl anti-MBP/MBL aos poços da amostra, a seguir adicione o streptavidin-HRP 50μl aos poços da amostra e aos poços padro (poço do controle no vazio). Misture bem. Cubra a placa com um aferidor. Incube 60 minutos em 37°C.
5. Remova o aferidor e lave a placa 5 vezes com amortecedor da lavagem. Embeba poços com pelo menos o amortecedor da lavagem de 0,35 ml para 30 segundos a 1 minuto para cada Washington. Para a lavagem automatizada, aspire todos os poços e lave 5 vezes com o amortecedor da lavagem, enchendo em demasia jorra com amortecedor da lavagem. Borre a placa nas toalhas de papel ou no outro material absorvente.
6. Adicione a soluço A da carcaça 50μl a cada um poço e adicione ento a soluço B da carcaça 50μl a cada um bem. Incube a placa coberta com um aferidor novo por 10 minutos em 37°C na obscuridade.
7. Adicione 50μl param a soluço a cada um bem, a cor azul mudará no amarelo imediatamente.
8. Determine a densidade ótica (valor do OD) de cada um poço que usa imediatamente um grupo do leitor do microplate a 450 nanômetro dentro de 10 minuetos após ter adicionado a soluço da parada.
Sumário
1. Prepare todos os reagentes, amostras e padrões.
2. Adicione a amostra e o reagente de ELISA em cada um bem. Incube para 1 hora em 37°C.
3. Lave a placa 5 vezes.
4. Adicione a soluço A e B. Incubaço da carcaça por 10 minutos em 37°C.
5. Adicione param a soluço e a cor torna-se.
6. Leia o valor do OD dentro de 10 minutos.
Referances
“a expresso Fase-específica da proteína básica do myelin nos
oligodendrocytes envolve a represso de Nkx2.2-mediated que é
aliviada pelo fator da transcriço Sp1.”
Wei Q., Miskimins W.K., Miskimins R.
J. Biol. Chem. 280:16284- 16294(2005)