96 de Wells 48 Wells da elevada precisão e da sensibilidade do rato do Glycogen beta ELISA jogo da sintase Kinase-3

Número de modelo:Cat.No E1251Mo
Lugar de origem:Xangai, China.
Quantidade de ordem mínima:negociação
Capacidade da fonte:Western union, T/T
Tempo de entrega:1-3 dias úteis, pedido em grandes quantidades dentro de uma semana
Detalhes de empacotamento:Envolvido com bloco de gelo e pacote do isopor
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96 de Wells 48 Wells da elevada preciso e da sensibilidade do rato do Glycogen beta ELISA jogo da sintase Kinase-3

 

Cat.No E1251Mo

Escala padro da curva: 0.05ng/ml - 30ng/ml

Sensibilidade: 0.024ng/ml

Tamanho: 96 poços

Armazenamento: Armazene os reagentes em 2-8°C. para um armazenamento de mais de 6 meses referem a data de validade mantêm-no em ciclos repetidos Avoid da aproximaço amigável de -20°C. Se os reagentes individuais so abertos recomenda-se que o jogo esteja usado dentro de 1 mês.

o produto dos *This é para o uso da pesquisa somente, no para o uso em procedimentos do diagnóstico. É recomenda altamente ler inteiramente antes de usar esta instruço.

 

Uso pretendido

Este jogo do sanduíche é para a detecço quantitativa exata da sintase Kinase-3 do Glycogen do rato beta (igualmente sabido como Gsk3b) no soro, plasma, supernates da cultura celular, lysates da pilha, homogenates do tecido.

 

Reagente fornecido

ComponentesQuantidade
Soluço padro (40ng/ml)0.5ml x1
Placa pré-revestida de ELISA12 * 8 tiras boas x1
Diluente padro3ml x1
Streptavidin-HRP6ml x1
Pare a soluço6ml x1
Soluço A da carcaça6ml x1
Soluço B da carcaça6ml x1
Concentrado do amortecedor da lavagem (30x)20ml x1
Anticorpo do rato Gsk3b de Biotinylated1ml x1
Instruço do usuário1
Aferidor da placapics 2
Saco do zíper1 PIC

 

Material exigido mas no fornecido

  • Incubadora 37°C±0.5°C
  • Papel absorvente
  • Pipeta da preciso e pontas descartáveis da pipeta
  • Limpe os tubos
  • Deionized ou água destilada
  • Leitor de Microplate com 450 o filtro do comprimento de onda do ± 10nm

 

Coleço de espécime

O soro permite que o soro coagule por 10-20 minutos na temperatura ambiente. Centrifugador em 2000-3000 RPM por 20 minutos.

 

O plasma recolhe o plasma usando o EDTA ou a heparina como um anticoagulante. Centrifugue amostras por 15 minutos em 2000-3000 RPM em 2 - 8°C dentro de 30 minutos da coleço.

 

A urina recolhe pelo tubo estéril. Centrifugador em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Ao recolher o líquido fluido e cerebrospinal pleuroperitoneal, siga por favor os procedimentos acima mencionados.

 

O Supernatant da cultura celular recolhe pelos tubos estéreis ao examinar segregue componentes. Centrifugue em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Recolha os supernatants com cuidado. Ao examinar os componentes dentro da pilha, use PBS (pH 7.2-7.4) para diluir a suspenso da pilha concentraço da pilha de aproximadamente 1 million/ml. Danifique pilhas através dos ciclos repetidos da gelo-aproximaço amigável para deixar para fora os componentes internos. Centrifugue em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.

 

O tecido outros líquidos de corpo enxágua tecidos em PBS (pH 7,4) para remover completamente o sangue adicional e para pesá-lo antes da homogeneizaço. Triture tecidos e homogeneize-os em PBS (pH7.4) com um homogenizador de vidro no gelo. Aproximaço amigável em 2-8°C ou gelo no centrifugador de -20°C. em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.

 

Preparaço do reagente

Todos os reagentes devem ser trazidos temperatura ambiente antes de usar.

O padro reconstitui o 120μl do padro (40ng/ml) com o 120μl do diluente padro para gerar uma soluço 20ng/ml conservada em estoque padro. Permita que o padro sente-se por 15 minutos com agitaço delicada antes de fazer diluições. Prepare pontos padro duplicados em série diluindo o 1:2 padro da soluço conservada em estoque (20ng/ml) com o diluente padro para produzir as soluções 10ng/ml, 5ng/ml, 2.5ng/ml e 1.25ng/ml. O diluente padro serve como o padro zero (0 ng/ml). Toda a soluço restante deve ser congelada em -20℃ e ser usada dentro de um mês. A diluiço das soluções padro sugeridas é como segue:

20ng/mlPadro No.5diluente original do padro 120μl + do padro 120μl
10ng/mlPadro No.4padro 120μl diluente do padro No.5 + 120μl
5ng/mlPadro No.3padro 120μl diluente do padro No.4 + 120μl
2.5ng/mlPadro No.2padro 120μl diluente do padro No.3 + 120μl
1.25ng/mlPadro No.1padro 120μl diluente do padro No.2 + 120μl

 

Concentraço padroPadro No.5Padro No.4Padro No.3Padro No.2Padro No.1
40ng/ml20ng/ml10ng/ml5ng/ml2.5ng/ml1.25ng/ml

 

Amortecedor 20ml diluído da lavagem do concentrado 30x do amortecedor da lavagem no deionized ou água destilada para render 500 ml do amortecedor da lavagem 1x. Se os cristais formaram no concentrado, mistura delicadamente até que os cristais se dissolverem completamente.

 

Sumário

1. Prepare todos os reagentes, amostras e padrões.

2. Adicione a amostra e o reagente de ELISA em cada um bem. Incube para 1 hora em 37°C.

3. Lave a placa 5 vezes.

4. Adicione a soluço A e B. Incubaço da carcaça por 10 minutos em 37°C.

5. Adicione param a soluço e a cor torna-se.

6. Leia o valor do OD dentro de 10 minutos.

 

Cálculo de resultado

Construa uma curva padro traçando o OD médio para cada padro no vertical (Y) linha central contra a concentraço no horizontal (X) a linha central e tira uma melhor curva do ajuste através dos pontos no gráfico. Estes cálculos podem melhor ser executados com o software por computador do curva-encaixe e a melhor linha do ajuste pode ser determinada pela análise de regresso.

 

Referances

“Interrompido na esquizofrenia 1 regula a proliferaço neuronal do ancestral através da modulaço de GSK3beta/beta-catenin sinalizaço.”
Mao Y., Ge X., Frank C.L., Madison J.M., Koehler A.N., Doud M.K., Tassa C., baga E.M., soda T., Singh K.K., Biechele T., Petryshen T.L., lua R.T., Haggarty S.J., Tsai L.H.
Pilha 136:1017- 1031(2009)

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96 de Wells 48 Wells da elevada precisão e da sensibilidade do rato do Glycogen beta ELISA jogo da sintase Kinase-3

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