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Tipo jogo do sanduíche da gama ELISA da interferona do rato com 2
horas de tempo do ensaio
Cat.No E0056Mo
Escala padro da curva: 5ng/L - 1000ng/L
Sensibilidade: 2.43ng/L
Tamanho: 96 poços
Armazenamento: Armazene os reagentes em 2-8°C. para um armazenamento de mais de 6 meses referem a data de validade mantêm-no em ciclos repetidos Avoid da aproximaço amigável de -20°C. Se os reagentes individuais so abertos recomenda-se que o jogo esteja usado dentro de 1 mês.
o produto dos *This é para o uso da pesquisa somente, no para o uso em procedimentos do diagnóstico. É recomenda altamente ler inteiramente antes de usar esta instruço.
Uso pretendido
Este jogo do sanduíche é para a detecço quantitativa exata de gama da interferona do rato (igualmente conhecida como a IFN-gama) no soro, plasma, supernates da cultura celular, lysates da pilha, homogenates do tecido.
Reagente fornecido
| Componentes | Quantidade |
| Soluço padro (1280ng/L) | 0.5ml x1 |
| Placa pré-revestida de ELISA | 12 * 8 tiras boas x1 |
| Diluente padro | 3ml x1 |
| Streptavidin-HRP | 6ml x1 |
| Pare a soluço | 6ml x1 |
| Soluço A da carcaça | 6ml x1 |
| Soluço B da carcaça | 6ml x1 |
| Concentrado do amortecedor da lavagem (30x) | 20ml x1 |
| Anticorpo da IFN-gama do rato de Biotinylated | 1ml x1 |
| Instruço do usuário | 1 |
| Aferidor da placa | pics 2 |
| Saco do zíper | 1 PIC |
Material exigido mas no fornecido
Precauções
Coleço de espécime
O soro permite que o soro coagule por 10-20 minutos na temperatura ambiente. Centrifugador em 2000-3000 RPM por 20 minutos.
O plasma recolhe o plasma usando o EDTA ou a heparina como um anticoagulante. Centrifugue amostras por 15 minutos em 2000-3000 RPM em 2 - 8°C dentro de 30 minutos da coleço.
A urina recolhe pelo tubo estéril. Centrifugador em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Ao recolher o líquido fluido e cerebrospinal pleuroperitoneal, siga por favor os procedimentos acima mencionados.
O Supernatant da cultura celular recolhe pelos tubos estéreis ao examinar segregue componentes. Centrifugue em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Recolha os supernatants com cuidado. Ao examinar os componentes dentro da pilha, use PBS (pH 7.2-7.4) para diluir a suspenso da pilha concentraço da pilha de aproximadamente 1 million/ml. Danifique pilhas através dos ciclos repetidos da gelo-aproximaço amigável para deixar para fora os componentes internos. Centrifugue em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
O tecido outros líquidos de corpo enxágua tecidos em PBS (pH 7,4) para remover completamente o sangue adicional e para pesá-lo antes da homogeneizaço. Triture tecidos e homogeneize-os em PBS (pH7.4) com um homogenizador de vidro no gelo. Aproximaço amigável em 2-8°C ou gelo no centrifugador de -20°C. em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
o *Sample no pode ser diluído com este jogo. Devido o ao material nós usamo-nos para preparar o jogo, a interferência de matriz da amostra pode falsamente comprimir a especificidade e a preciso do ensaio.
Preparaço do reagente
Todos os reagentes devem ser trazidos temperatura ambiente antes de usar.
O padro reconstitui o 120μl do padro (1280ng/L) com o 120μl do diluente padro para gerar uma soluço 640ng/L conservada em estoque padro. Permita que o padro sente-se por 15 minutos com agitaço delicada antes de fazer diluições. Prepare pontos padro duplicados em série diluindo a soluço conservada em estoque padro (640ng/L) 1:2 com o diluente padro para produzir as soluções 320ng/L, 160ng/L, 80ng/L e 40ng/L. O diluente padro serve como o padro zero (0 ng/L). Toda a soluço restante deve ser congelada em -20℃ e ser usada dentro de um mês. A diluiço das soluções padro sugeridas é como segue:
| 640ng/L | Padro No.5 | diluente original do padro 120μl + do padro 120μl |
| 320ng/L | Padro No.4 | padro 120μl diluente do padro No.5 + 120μl |
| 160ng/L | Padro No.3 | padro 120μl diluente do padro No.4 + 120μl |
| 80ng/L | Padro No.2 | padro 120μl diluente do padro No.3 + 120μl |
| 40ng/L | Padro No.1 | padro 120μl diluente do padro No.2 + 120μl |
| Concentraço padro | Padro No.5 | Padro No.4 | Padro No.3 | Padro No.2 | Padro No.1 |
| 1280ng/L | 640ng/L | 320ng/L | 160ng/L | 80ng/L | 40ng/L |
Amortecedor 20ml diluído da lavagem do concentrado 30x do amortecedor da lavagem no deionized ou água destilada para render 500 ml do amortecedor da lavagem 1x. Se os cristais formaram no concentrado, mistura delicadamente até que os cristais se dissolverem completamente.
Sumário
1. Prepare todos os reagentes, amostras e padrões.
2. Adicione a amostra e o reagente de ELISA em cada um bem. Incube para 1 hora em 37°C.
3. Lave a placa 5 vezes.
4. Adicione a soluço A e B. Incubaço da carcaça por 10 minutos em 37°C.
5. Adicione param a soluço e a cor torna-se.
6. Leia o valor do OD dentro de 10 minutos.
Cálculo de resultado
Construa uma curva padro traçando o OD médio para cada padro no vertical (Y) linha central contra a concentraço no horizontal (X) a linha central e tira uma melhor curva do ajuste através dos pontos no gráfico. Estes cálculos podem melhor ser executados com o software por computador do curva-encaixe e a melhor linha do ajuste pode ser determinada pela análise de regresso.
Referances
a “IFN-gama dá forma invaso imune do sistema nervoso central
através do regulamento dos chemokines.”
Tran E.H., príncipe E.N., Owens T.
J. Immunol. 164:2759- 2768(2000)