Jogo personalizado Wells sensível alto do rato MGP ELISA do jogo 96 da proteína ELISA de Gla da matriz do rato

Número de modelo:Cat.No E1801Mo
Lugar de origem:Xangai, China.
Quantidade de ordem mínima:negociação
Capacidade da fonte:Western union, T/T
Tempo de entrega:1-3 dias úteis, pedido em grandes quantidades dentro de uma semana
Detalhes de empacotamento:Envolvido com bloco de gelo e pacote do isopor
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Jogo personalizado Wells sensível alto do rato MGP ELISA do jogo 96 da proteína ELISA de Gla da matriz do rato
 
Cat.No E1801Mo
Escala padro da curva: 5ng/L - 2000ng/L
Sensibilidade: 3.09ng/L
Tamanho: 96 poços
Armazenamento: Armazene os reagentes em 2-8°C. para um armazenamento de mais de 6 meses referem a data de validade mantêm-no em ciclos repetidos Avoid da aproximaço amigável de -20°C. Se os reagentes individuais so abertos recomenda-se que o jogo esteja usado dentro de 1 mês.
o produto dos *This é para o uso da pesquisa somente, no para o uso em procedimentos do diagnóstico. É recomenda altamente ler inteiramente antes de usar esta instruço.
 
Uso pretendido
Este jogo do sanduíche é para a detecço quantitativa exata de proteína de Gla da matriz do rato (igualmente conhecida como MGP) no soro, plasma, supernates da cultura celular, lysates da pilha, homogenates do tecido.
 
Princípio do ensaio
Este jogo é um ensaio Enzima-ligado da imunoabsorço (ELISA). A placa foi pré-revestida com o anticorpo do rato MGP. MGP apresentam na amostra so adicionados e ligam aos anticorpos revestidos nos poços. E o anticorpo ento biotinylated do rato MGP é adicionado e liga a MGP na amostra. Ento Streptavidin-HRP é adicionado e liga ao anticorpo de Biotinylated MGP. Após a incubaço Streptavidin-HRP desatado é lavado afastado durante uma etapa de lavagem. A soluço da carcaça é adicionada ento e a cor torna-se em proporço quantidade do rato MGP. A reaço é terminada pela adiço de ácido para a soluço e a absorvência é medida em 450 nanômetro.
 
Reagente fornecido

ComponentesQuantidade
Soluço padro (2400ng/L)0.5ml x1
Placa pré-revestida de ELISA12 * 8 tiras boas x1
Diluente padro3ml x1
Streptavidin-HRP6ml x1
Pare a soluço6ml x1
Soluço A da carcaça6ml x1
Soluço B da carcaça6ml x1
Concentrado do amortecedor da lavagem (30x)20ml x1
Anticorpo do rato MGP de Biotinylated1ml x1
Instruço do usuário1
Aferidor da placapics 2
Saco do zíper1 PIC

 
Preparaço do reagente
Todos os reagentes devem ser trazidos temperatura ambiente antes de usar.
O padro reconstitui o 120μl do padro (2400ng/L) com o 120μl do diluente padro para gerar uma soluço 1200ng/L conservada em estoque padro. Permita que o padro sente-se por 15 minutos com agitaço delicada antes de fazer diluições. Prepare pontos padro duplicados em série diluindo a soluço conservada em estoque padro (1200ng/L) 1:2 com o diluente padro para produzir as soluções 600ng/L, 300ng/L, 150ng/L e 75ng/L. O diluente padro serve como o padro zero (0 ng/L). Toda a soluço restante deve ser congelada em -20°C e ser usada dentro de um mês. A diluiço das soluções padro sugeridas é como segue:

1200ng/LPadro No.5diluente original do padro 120μl + do padro 120μl
600ng/LPadro No.4padro 120μl diluente do padro No.5 + 120μl
300ng/LPadro No.3padro 120μl diluente do padro No.4 + 120μl
150ng/LPadro No.2padro 120μl diluente do padro No.3 + 120μl
75ng/LPadro No.1padro 120μl diluente do padro No.2 + 120μl

 

Concentraço padroPadro No.5Padro No.4Padro No.3Padro No.2Padro No.1
2400ng/L1200ng/L600ng/L300ng/L150ng/L75ng/L

 
Amortecedor 20ml diluído da lavagem do concentrado 30x do amortecedor da lavagem no deionized ou água destilada para render 500 ml do amortecedor da lavagem 1x. Se os cristais formaram no concentrado, mistura delicadamente até que os cristais se dissolverem completamente.
 
Procedimento de ensaio
1. Prepare todos os reagentes, soluções padro e amostras como instruídas. Traga todos os reagentes temperatura ambiente antes de usar. O ensaio é executado na temperatura ambiente.
2. Determine o número de tiras exigidas para o ensaio. Introduza as tiras nos quadros para o uso. As tiras no utilizadas devem ser armazenadas em 2-8°C.
3. Adicione o padro 50μl ao padro bem. Nota: No adicione o anticorpo ao padro bem porque a soluço padro contém o anticorpo biotinylated.
4. Adicione a amostra 40μl aos poços da amostra e ento adicione o anti-MGP anticorpo 10μl aos poços da amostra, a seguir adicione o streptavidin-HRP 50μl aos poços da amostra e aos poços padro (poço do controle no vazio). Misture bem. Cubra a placa com um aferidor. Incube 60 minutos em 37°C.
5. Remova o aferidor e lave a placa 5 vezes com amortecedor da lavagem. Embeba poços com pelo menos o amortecedor da lavagem de 0,35 ml para 30 segundos a 1 minuto para cada Washington. Para a lavagem automatizada, aspire todos os poços e lave 5 vezes com o amortecedor da lavagem, enchendo em demasia jorra com amortecedor da lavagem. Borre a placa nas toalhas de papel ou no outro material absorvente.
6. Adicione a soluço A da carcaça 50μl a cada um poço e adicione ento a soluço B da carcaça 50μl a cada um bem. Incube a placa coberta com um aferidor novo por 10 minutos em 37°C na obscuridade.
7. Adicione 50μl param a soluço a cada um bem, a cor azul mudará no amarelo imediatamente.
8. Determine a densidade ótica (valor do OD) de cada um poço que usa imediatamente um grupo do leitor do microplate a 450 nanômetro dentro de 10 minuetos após ter adicionado a soluço da parada.
 
Referances
De “upregulation e polimerizaço Osteopontin pelo transglutaminase 2 em artérias calcificadas de ratos proteína-deficientes de Gla da matriz.”
TA de Kaartinen, Murshed M., Karsenty G., McKee M.D.
J. Histochem. Cytochem. 55:375- 386(2007)

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