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Jogo forte humano do teste do jogo PFKM ELISA do ensaio do músculo
ELISA de Phosphofructokinase da sensibilidade personalizado
Cat.No E6646Hu
Preparaço do reagente
Todos os reagentes devem ser trazidos temperatura ambiente antes de
usar.
O padro reconstitui o 120μl do padro (80ng/ml) com o 120μl do diluente
padro para gerar uma soluço 40ng/ml conservada em estoque padro.
Permita que o padro sente-se por 15 minutos com agitaço delicada
antes de fazer diluições. Prepare pontos padro duplicados em série
diluindo o 1:2 padro da soluço conservada em estoque (40ng/ml) com
o diluente padro para produzir as soluções 20ng/ml, 10ng/ml, 5ng/ml
e 2.5ng/ml. O diluente padro serve como o padro zero (0 ng/ml).
Toda a soluço restante deve ser congelada em -20°C e ser usada
dentro de um mês. A diluiço das soluções padro sugeridas é como
segue:
40ng/ml | Padro No.5 | diluente original do padro 120μl + do padro 120μl |
20ng/ml | Padro No.4 | padro 120μl diluente do padro No.5 + 120μl |
10ng/ml | Padro No.3 | padro 120μl diluente do padro No.4 + 120μl |
5ng/ml | Padro No.2 | padro 120μl diluente do padro No.3 + 120μl |
2.5ng/ml | Padro No.1 | padro 120μl diluente do padro No.2 + 120μl |
Concentraço padro | Padro No.5 | Padro No.4 | Padro No.3 | Padro No.2 | Padro No.1 |
80ng/ml | 40ng/ml | 20ng/ml | 10ng/ml | 5ng/ml | 2.5ng/ml |
Amortecedor 20ml diluído da lavagem do concentrado 25x do amortecedor da lavagem no deionized ou água
destilada para render 500 ml do amortecedor da lavagem 1x. Se os
cristais formaram no concentrado, mistura delicadamente até que os
cristais se dissolverem completamente.
Procedimento de ensaio
1. Prepare todos os reagentes, soluções padro e amostras como
instruídas. Traga todos os reagentes temperatura ambiente antes de
usar. O ensaio é executado na temperatura ambiente.
2. Determine o número de tiras exigidas para o ensaio. Introduza as
tiras nos quadros para o uso. As tiras no utilizadas devem ser
armazenadas em 2-8°C.
3. Adicione o padro 50μl ao padro bem. Nota: No adicione o anticorpo ao padro bem porque a soluço padro contém
o anticorpo biotinylated.
4. Adicione a amostra 40μl aos poços da amostra e ento adicione o
anti-PFKM anticorpo 10μl aos poços da amostra, a seguir adicione o
streptavidin-HRP 50μl aos poços da amostra e aos poços padro (poço
do controle no vazio). Misture bem. Cubra a placa com um aferidor.
Incube 60 minutos em 37°C.
5. Remova o aferidor e lave a placa 5 vezes com amortecedor da
lavagem. Embeba poços com pelo menos o amortecedor da lavagem de
0,35 ml para 30 segundos a 1 minuto para cada Washington. Para a
lavagem automatizada, aspire todos os poços e lave 5 vezes com o
amortecedor da lavagem, enchendo em demasia jorra com amortecedor
da lavagem. Borre a placa nas toalhas de papel ou no outro material
absorvente.
6. Adicione a soluço A da carcaça 50μl a cada um poço e adicione ento
a soluço B da carcaça 50μl a cada um bem. Incube a placa coberta
com um aferidor novo por 10 minutos em 37°C na obscuridade.
7. Adicione 50μl param a soluço a cada um bem, a cor azul mudará no
amarelo imediatamente.
8. Determine a densidade ótica (valor do OD) de cada um poço que usa
imediatamente um grupo do leitor do microplate a 450 nanômetro
dentro de 10 minuetos após ter adicionado a soluço da parada.
Escala padro da curva: 0.2ng/ml - 70ng/ml
Sensibilidade: 0.096ng/ml
Tamanho: 96 poços
Armazenamento: Armazene os reagentes em 2-8°C. para um armazenamento de mais de
6 meses referem a data de validade mantêm-no em ciclos repetidos
Avoid da aproximaço amigável de -20°C. Se os reagentes individuais
so abertos recomenda-se que o jogo esteja usado dentro de 1 mês.
o produto dos *This é para o uso da pesquisa somente, no para o uso
em procedimentos do diagnóstico. É recomenda altamente ler
inteiramente antes de usar esta instruço.
Uso pretendido
Este jogo do sanduíche é para a detecço quantitativa exata de
músculo de Phosphofructokinase do ser humano (igualmente conhecido
como PFKM) no soro, plasma, supernates da cultura celular, lysates
da pilha, homogenates do tecido.
Princípio do ensaio
Este jogo do ensaio de ELISA é um ensaio Enzima-ligado da
imunoabsorço (ELISA). A placa foi pré-revestida com o anticorpo
humano de PFKM. PFKM apresentam na amostra so adicionados e ligam
aos anticorpos revestidos nos poços. E o anticorpo humano ento
biotinylated de PFKM é adicionado e liga a PFKM na amostra. Ento
Streptavidin-HRP é adicionado e liga ao anticorpo de Biotinylated
PFKM. Após a incubaço Streptavidin-HRP desatado é lavado afastado
durante uma etapa de lavagem. A soluço da carcaça é adicionada ento
e a cor torna-se em proporço quantidade de PFKM humano. A reaço é
terminada pela adiço de ácido para a soluço e a absorvência é
medida em 450 nanômetro.
Coleço de espécime
O soro permite que o soro coagule por 10-20 minutos na temperatura
ambiente. Centrifugador em 2000-3000 RPM por 20 minutos.
O plasma recolhe o plasma usando o EDTA ou a heparina como um
anticoagulante. Centrifugue amostras por 15 minutos em 2000-3000
RPM em 2 - 8°C dentro de 30 minutos da coleço.
A urina recolhe pelo tubo estéril. Centrifugador em 2000-3000 RPM por
aproximadamente 20 minutos. Ao recolher o líquido fluido e
cerebrospinal pleuroperitoneal, siga por favor os procedimentos
acima mencionados.
O Supernatant da cultura celular recolhe pelos tubos estéreis ao examinar segregue componentes.
Centrifugue em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
Recolha os supernatants com cuidado. Ao examinar os componentes
dentro da pilha, use PBS (pH 7.2-7.4) para diluir a suspenso da
pilha concentraço da pilha de aproximadamente 1 million/ml.
Danifique pilhas através dos ciclos repetidos da gelo-aproximaço
amigável para deixar para fora os componentes internos. Centrifugue
em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
Tecidos da lavagem do tecido em PBS (pH 7,4) para remover completamente o sangue adicional e a
pesá-lo antes da homogeneizaço. Triture tecidos e homogeneize-os em
PBS (pH7.4) com um homogenizador de vidro no gelo. Aproximaço
amigável em 2-8°C ou gelo no centrifugador de -20°C. em 2000-3000
RPM por aproximadamente 20 minutos.
o *Sample no pode ser diluído com este jogo. Devido o ao material
nós usamo-nos para preparar o jogo, a interferência de matriz da
amostra pode falsamente comprimir a especificidade e a preciso do
ensaio.