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Realçador sensível alto humano do conector do jogo de CNKSR1 ELISA
do supressor da quinase de Ras 1 jogo do ensaio de ELISA
Cat.No E6627Hu
Precauções
Preciso
A preciso do Intra-ensaio (preciso dentro de um ensaio) três
amostras de concentraço conhecida foi testada em uma placa para
avaliar a preciso do intra-ensaio.
A preciso do Inter-ensaio (preciso entre ensaios) três amostras de
concentraço conhecida foi testada em ensaios separados para avaliar
a preciso do inter-ensaio.
CV (%) = SD/mean x 100
Intra-ensaio: CV<8>
Inter-ensaio: CV<10>
Princípio do ensaio
Este jogo do sanduíche ELISA é um ensaio Enzima-ligado da
imunoabsorço (ELISA). A placa foi pré-revestida com o anticorpo
CNKSR1 humano. CNKSR1 apresentam na amostra so adicionados e ligam
aos anticorpos revestidos nos poços. E o anticorpo CNKSR1 humano
ento biotinylated é adicionado e liga a CNKSR1 na amostra. Ento
Streptavidin-HRP é adicionado e liga ao anticorpo de Biotinylated
CNKSR1. Após a incubaço Streptavidin-HRP desatado é lavado afastado
durante uma etapa de lavagem. A soluço da carcaça é adicionada ento
e a cor torna-se em proporço quantidade de CNKSR1 humano. A reaço é
terminada pela adiço de ácido para a soluço e a absorvência é
medida em 450 nanômetro.
Uso pretendido
Este jogo do sanduíche é para a detecço quantitativa exata de
realçador humano do conector do supressor da quinase de Ras 1
(igualmente conhecido como CNKSR1) no soro, plasma, supernates da
cultura celular, lysates da pilha, homogenates do tecido.
Reagente fornecido
Componentes | Quantidade |
Soluço padro (1600ng/L) | 0.5ml x1 |
Placa pré-revestida de ELISA | 12 * 8 tiras boas x1 |
Diluente padro | 3ml x1 |
Streptavidin-HRP | 6ml x1 |
Pare a soluço | 6ml x1 |
Soluço A da carcaça | 6ml x1 |
Soluço B da carcaça | 6ml x1 |
Concentrado do amortecedor da lavagem (25x) | 20ml x1 |
Anticorpo CNKSR1 humano de Biotinylated | 1ml x1 |
Instruço do usuário | 1 |
Aferidor da placa | pics 2 |
Saco do zíper | 1 PIC |
Coleço de espécime
O soro permite que o soro coagule por 10-20 minutos na temperatura
ambiente. Centrifugador em 2000-3000 RPM por 20 minutos.
O plasma recolhe o plasma usando o EDTA ou a heparina como um
anticoagulante. Centrifugue amostras por 15 minutos em 2000-3000
RPM em 2 - 8°C dentro de 30 minutos da coleço.
A urina recolhe pelo tubo estéril. Centrifugador em 2000-3000 RPM por
aproximadamente 20 minutos. Ao recolher o líquido fluido e
cerebrospinal pleuroperitoneal, siga por favor os procedimentos
acima mencionados.
O Supernatant da cultura celular recolhe pelos tubos estéreis ao examinar segregue componentes.
Centrifugue em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
Recolha os supernatants com cuidado. Ao examinar os componentes
dentro da pilha, use PBS (pH 7.2-7.4) para diluir a suspenso da
pilha concentraço da pilha de aproximadamente 1 million/ml.
Danifique pilhas através dos ciclos repetidos da gelo-aproximaço
amigável para deixar para fora os componentes internos. Centrifugue
em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
O tecido e outros líquidos de corpo enxáguam tecidos em PBS (pH 7,4) para remover completamente o
sangue adicional e para pesá-lo antes da homogeneizaço. Triture
tecidos e homogeneize-os em PBS (pH7.4) com um homogenizador de
vidro no gelo. Aproximaço amigável em 2-8°C ou gelo no
centrifugador de -20°C. em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20
minutos.
o *Sample no pode ser diluído com este jogo. Devido o ao material
nós usamo-nos para preparar o jogo, a interferência de matriz da
amostra pode falsamente comprimir a especificidade e a preciso do
ensaio.
Procedimento de ensaio
1. Prepare todos os reagentes, soluções padro e amostras como
instruídas. Traga todos os reagentes temperatura ambiente antes de
usar. O ensaio é executado na temperatura ambiente.
2. Determine o número de tiras exigidas para o ensaio. Introduza as
tiras nos quadros para o uso. As tiras no utilizadas devem ser
armazenadas em 2-8°C.
3. Adicione o padro 50μl ao padro bem. Nota: No adicione o anticorpo ao padro bem porque a soluço padro contém
o anticorpo biotinylated.
4. Adicione a amostra 40μl aos poços da amostra e ento adicione o
anticorpo de 10μl anti-CNKSR1 aos poços da amostra, a seguir
adicione o streptavidin-HRP 50μl aos poços da amostra e aos poços
padro (poço do controle no vazio). Misture bem. Cubra a placa com
um aferidor. Incube 60 minutos em 37°C.
5. Remova o aferidor e lave a placa 5 vezes com amortecedor da
lavagem. Embeba poços com pelo menos o amortecedor da lavagem de
0,35 ml para 30 segundos a 1 minuto para cada Washington. Para a
lavagem automatizada, aspire todos os poços e lave 5 vezes com o
amortecedor da lavagem, enchendo em demasia jorra com amortecedor
da lavagem. Borre a placa nas toalhas de papel ou no outro material
absorvente.
6. Adicione a soluço A da carcaça 50μl a cada um poço e adicione ento
a soluço B da carcaça 50μl a cada um bem. Incube a placa coberta
com um aferidor novo por 10 minutos em 37°C na obscuridade.
7. Adicione 50μl param a soluço a cada um bem, a cor azul mudará no
amarelo imediatamente.
8. Determine a densidade ótica (valor do OD) de cada um poço que usa
imediatamente um grupo do leitor do microplate a 450 nanômetro
dentro de 10 minuetos após ter adicionado a soluço da parada.