Proteína Cationic personalizada do Eosinophil alto humano da especificidade do jogo do sanduíche ELISA do ECP
Número de modelo:Cat.No E1391Hu
Lugar de origem:Xangai, China.
Quantidade de ordem mínima:negociação
Capacidade da fonte:Western union, T/T
Tempo de entrega:1-3 dias úteis, pedido em grandes quantidades dentro de uma semana
Detalhes de empacotamento:Envolvido com bloco de gelo e pacote do isopor
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Jogo Cationic personalizado do ensaio da proteína ELISA do Eosinophil alto humano da especificidade do jogo do sanduíche ELISA do ECP
Cat.No E1391Hu
Uso pretendido
Este jogo do sanduíche é para a detecço quantitativa exata de proteína Cationic do Eosinophil humano (igualmente conhecida como o ECP) no soro, plasma, supernates da cultura celular, lysates da pilha, homogenates do tecido.
Sensibilidade: 0.25ng/ml
Escala padro da curva: 0.5ng/ml - 100ng/ml
o produto dos *This é para o uso da pesquisa somente, no para o uso em procedimentos do diagnóstico. É recomenda altamente ler inteiramente antes de usar esta instruço.
Preciso
A preciso do Intra-ensaio (preciso dentro de um ensaio) três amostras de concentraço conhecida foi testada em uma placa para avaliar a preciso do intra-ensaio.
A preciso do Inter-ensaio (preciso entre ensaios) três amostras de concentraço conhecida foi testada em ensaios separados para avaliar a preciso do inter-ensaio.
CV (%) = SD/mean x 100
Intra-ensaio: CV<8>
Inter-ensaio: CV<10>
Reagente fornecido
| Componentes | Quantidade |
| Soluço padro (120ng/ml) | 0.5ml x1 |
| Placa pré-revestida de ELISA | 12 * 8 tiras boas x1 |
| Diluente padro | 3ml x1 |
| Streptavidin-HRP | 6ml x1 |
| Pare a soluço | 6ml x1 |
| Soluço A da carcaça | 6ml x1 |
| Soluço B da carcaça | 6ml x1 |
| Concentrado do amortecedor da lavagem (25x) | 20ml x1 |
| Anticorpo humano do ECP de Biotinylated | 1ml x1 |
| Instruço do usuário | 1 |
| Aferidor da placa | pics 2 |
| Saco do zíper | 1 PIC |
Material exigido mas no fornecido
- Incubadora 37°C±0.5°C
- Papel absorvente
- Pipeta da preciso e pontas descartáveis da pipeta
- Limpe os tubos
- Deionized ou água destilada
- Leitor de Microplate com 450 o filtro do comprimento de onda do ± 10nm
Preparaço do reagente
Todos os reagentes devem ser trazidos temperatura ambiente antes de usar.
O padro reconstitui o 120μl do padro (120ng/ml) com o 120μl do diluente padro para gerar uma soluço 60ng/ml conservada em estoque padro. Permita que o padro sente-se por 15 minutos com agitaço delicada antes de fazer diluições. Prepare pontos padro duplicados em série diluindo o 1:2 padro da soluço conservada em estoque (60ng/ml) com o diluente padro para produzir as soluções 30ng/ml, 15ng/ml, 7.5ng/ml e 3.75ng/ml. O diluente padro serve como o padro zero (0 ng/ml). Toda a soluço restante deve ser congelada em -20°C e ser usada dentro de um mês. A diluiço das soluções padro sugeridas é como segue:
| 60ng/ml | Padro No.5 | diluente original do padro 120μl + do padro 120μl |
| 30ng/ml | Padro No.4 | padro 120μl diluente do padro No.5 + 120μl |
| 15ng/ml | Padro No.3 | padro 120μl diluente do padro No.4 + 120μl |
| 7.5ng/ml | Padro No.2 | padro 120μl diluente do padro No.3 + 120μl |
| 3.75ng/ml | Padro No.1 | padro 120μl diluente do padro No.2 + 120μl |
| Concentraço padro | Padro No.5 | Padro No.4 | Padro No.3 | Padro No.2 | Padro No.1 |
| 120ng/ml | 60ng/ml | 30ng/ml | 15ng/ml | 7.5ng/ml | 3.75ng/ml |
Amortecedor 20ml diluído da lavagem do concentrado 25x do amortecedor da lavagem no deionized ou água destilada para render 500 ml do amortecedor da lavagem 1x. Se os cristais formaram no concentrado, mistura delicadamente até que os cristais se dissolverem completamente.
Procedimento de ensaio
1. Prepare todos os reagentes, soluções padro e amostras como instruídas. Traga todos os reagentes temperatura ambiente antes de usar. O ensaio é executado na temperatura ambiente.
2. Determine o número de tiras exigidas para o ensaio. Introduza as tiras nos quadros para o uso. As tiras no utilizadas devem ser armazenadas em 2-8°C.
3. Adicione o padro 50μl ao padro bem. Nota: No adicione o anticorpo ao padro bem porque a soluço padro contém o anticorpo biotinylated.
4. Adicione a amostra 40μl aos poços da amostra e ento adicione o anticorpo do anti-ECP 10μl aos poços da amostra, a seguir adicione o streptavidin-HRP 50μl aos poços da amostra e aos poços padro (poço do controle no vazio). Misture bem. Cubra a placa com um aferidor. Incube 60 minutos em 37°C.
5. Remova o aferidor e lave a placa 5 vezes com amortecedor da lavagem. Embeba poços com pelo menos o amortecedor da lavagem de 0,35 ml para 30 segundos a 1 minuto para cada Washington. Para a lavagem automatizada, aspire todos os poços e lave 5 vezes com o amortecedor da lavagem, enchendo em demasia jorra com amortecedor da lavagem. Borre a placa nas toalhas de papel ou no outro material absorvente.
6. Adicione a soluço A da carcaça 50μl a cada um poço e adicione ento a soluço B da carcaça 50μl a cada um bem. Incube a placa coberta com um aferidor novo por 10 minutos em 37°C na obscuridade.
7. Adicione 50μl param a soluço a cada um bem, a cor azul mudará no amarelo imediatamente.
8. Determine a densidade ótica (valor do OD) de cada um poço que usa imediatamente um grupo do leitor do microplate a 450 nanômetro dentro de 10 minuetos após ter adicionado a soluço da parada.
Cálculo de resultado
Construa uma curva padro traçando o OD médio para cada padro no vertical (Y) linha central contra a concentraço no horizontal (X) a linha central e tira uma melhor curva do ajuste através dos pontos no gráfico. Estes cálculos podem melhor ser executados com o software por computador do curva-encaixe e a melhor linha do ajuste pode ser determinada pela análise de regresso.
Proteína Cationic personalizada do Eosinophil alto humano da especificidade do jogo do sanduíche ELISA do ECP
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