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Os carneiros altos da sensibilidade e da especificidade GGT1 Enzima-ligaram o jogo 96 Wells do ensaio da imunoabsorço
o produto dos *This é para o uso da pesquisa somente, no para o uso em procedimentos do diagnóstico. É recomenda altamente ler inteiramente antes de usar esta instruço.
Cat.No E0203Sh
Escala padro da curva: 0.3ng/ml - 90ng/ml
Sensibilidade: 0.17ng/ml
Tamanho: 96 poços
Princípio do ensaio
Este jogo do ensaio do elisa é um ensaio Enzima-ligado da imunoabsorço (ELISA). A placa foi pré-revestida com o anticorpo dos carneiros GGT1. GGT1 apresentam na amostra so adicionados e ligam aos anticorpos revestidos nos poços. E o anticorpo ento biotinylated dos carneiros GGT1 é adicionado e liga a GGT1 na amostra. Ento Streptavidin-HRP é adicionado e liga ao anticorpo de Biotinylated GGT1. Após a incubaço Streptavidin-HRP desatado é lavado afastado durante uma etapa de lavagem. A soluço da carcaça é adicionada ento e a cor torna-se em proporço quantidade dos carneiros GGT1. A reaço é terminada pela adiço de ácido para a soluço e a absorvência é medida em 450 nanômetro.
Uso pretendido
Este jogo do sanduíche é para a detecço quantitativa exata da gama-glutamyltranspeptidase 1 dos carneiros (igualmente conhecida como GGT1) no soro, plasma, supernates da cultura celular, lysates da pilha, homogenates do tecido.
Preciso
A preciso do Intra-ensaio (preciso dentro de um ensaio) três amostras de concentraço conhecida foi testada em uma placa para avaliar a preciso do intra-ensaio.
A preciso do Inter-ensaio (preciso entre ensaios) três amostras de concentraço conhecida foi testada em ensaios separados para avaliar a preciso do inter-ensaio.
CV (%) = SD/mean x 100
Intra-ensaio: CV<8>
Inter-ensaio: CV<10>
Preparaço do reagente
Todos os reagentes devem ser trazidos temperatura ambiente antes de usar.
O padro reconstitui o 120μl do padro (96ng/ml) com o 120μl do diluente padro para gerar uma soluço 48ng/ml conservada em estoque padro. Permita que o padro sente-se por 15 minutos com agitaço delicada antes de fazer diluições. Prepare pontos padro duplicados em série diluindo o 1:2 padro da soluço conservada em estoque (48ng/ml) com o diluente padro para produzir as soluções 24ng/ml, 12ng/ml, 6ng/ml e 3ng/ml. O diluente padro serve como o padro zero (0 ng/ml). Toda a soluço restante deve ser congelada em -20°C e ser usada dentro de um mês. A diluiço das soluções padro sugeridas é como segue:
48ng/ml | Padro No.5 | diluente original do padro 120μl + do padro 120μl |
24ng/ml | Padro No.4 | padro 120μl diluente do padro No.5 + 120μl |
12ng/ml | Padro No.3 | padro 120μl diluente do padro No.4 + 120μl |
6ng/ml | Padro No.2 | padro 120μl diluente do padro No.3 + 120μl |
3ng/ml | Padro No.1 | padro 120μl diluente do padro No.2 + 120μl |
Concentraço padro | Padro No.5 | Padro No.4 | Padro No.3 | Padro No.2 | Padro No.1 |
96ng/ml | 48ng/ml | 24ng/ml | 12ng/ml | 6ng/ml | 3ng/ml |
Amortecedor 20ml diluído da lavagem do concentrado 25x do amortecedor da lavagem no deionized ou água destilada para render 500 ml do amortecedor da lavagem 1x. Se os cristais formaram no concentrado, mistura delicadamente até que os cristais se dissolverem completamente.
Procedimento de ensaio
1. Prepare todos os reagentes, soluções padro e amostras como instruídas. Traga todos os reagentes temperatura ambiente antes de usar. O ensaio é executado na temperatura ambiente.
2. Determine o número de tiras exigidas para o ensaio. Introduza as tiras nos quadros para o uso. As tiras no utilizadas devem ser armazenadas em 2-8°C.
3. Adicione o padro 50μl ao padro bem. Nota: No adicione o anticorpo ao padro bem porque a soluço padro contém o anticorpo biotinylated.
4. Adicione a amostra 40μl aos poços da amostra e ento adicione o anticorpo de 10μl anti-GGT1 aos poços da amostra, a seguir adicione o streptavidin-HRP 50μl aos poços da amostra e aos poços padro (poço do controle no vazio). Misture bem. Cubra a placa com um aferidor. Incube 60 minutos em 37°C.
5. Remova o aferidor e lave a placa 5 vezes com amortecedor da lavagem. Embeba poços com pelo menos o amortecedor da lavagem de 0,35 ml para 30 segundos a 1 minuto para cada Washington. Para a lavagem automatizada, aspire todos os poços e lave 5 vezes com o amortecedor da lavagem, enchendo em demasia jorra com amortecedor da lavagem. Borre a placa nas toalhas de papel ou no outro material absorvente.
6. Adicione a soluço A da carcaça 50μl a cada um poço e adicione ento a soluço B da carcaça 50μl a cada um bem. Incube a placa coberta com um aferidor novo por 10 minutos em 37°C na obscuridade.
7. Adicione 50μl param a soluço a cada um bem, a cor azul mudará no amarelo imediatamente.
8. Determine a densidade ótica (valor do OD) de cada um poço que usa imediatamente um grupo do leitor do microplate a 450 nanômetro dentro de 10 minuetos após ter adicionado a soluço da parada.
Cálculo de resultado
Construa uma curva padro traçando o OD médio para cada padro no vertical (Y) linha central contra a concentraço no horizontal (X) a linha central e tira uma melhor curva do ajuste através dos pontos no gráfico. Estes cálculos podem melhor ser executados com o software por computador do curva-encaixe e a melhor linha do ajuste pode ser determinada pela análise de regresso.