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O jogo forte humano do sanduíche ELISA de Angiopoietin 4 da
sensibilidade e da especificidade personalizou a placa de 96 poços
Cat.No E1263Hu
Escala padro da curva: 15ng/L - 3000ng/L
Sensibilidade: 7.73ng/L
Tamanho: 96 poços
Princípio do ensaio
Este jogo do teste do elisa é um ensaio Enzima-ligado da
imunoabsorço (ELISA). A placa foi pré-revestida com o anticorpo
ANG-4 humano. ANG-4 apresentam na amostra so adicionados e ligam
aos anticorpos revestidos nos poços. E o anticorpo ANG-4 humano
ento biotinylated é adicionado e liga a ANG-4 na amostra. Ento
Streptavidin-HRP é adicionado e liga ao anticorpo de Biotinylated
ANG-4. Após a incubaço Streptavidin-HRP desatado é lavado afastado
durante uma etapa de lavagem. A soluço da carcaça é adicionada ento
e a cor torna-se em proporço quantidade de ANG-4 humano. A reaço é
terminada pela adiço de ácido para a soluço e a absorvência é
medida em 450 nanômetro.
o produto dos *This é para o uso da pesquisa somente, no para o uso
em procedimentos do diagnóstico. É recomenda altamente ler
inteiramente antes de usar esta instruço.
Precauções
Preparaço do reagente
Todos os reagentes devem ser trazidos temperatura ambiente antes de
usar.
O padro reconstitui o 120μl do padro (3200ng/L) com o 120μl do diluente
padro para gerar uma soluço 1600ng/L conservada em estoque padro.
Permita que o padro sente-se por 15 minutos com agitaço delicada
antes de fazer diluições. Prepare pontos padro duplicados em série
diluindo a soluço conservada em estoque padro (1600ng/L) 1:2 com o
diluente padro para produzir as soluções 800ng/L, 400ng/L, 200ng/L
e 100ng/L. O diluente padro serve como o padro zero (0 ng/L). Toda
a soluço restante deve ser congelada em -20°C e ser usada dentro de
um mês. A diluiço das soluções padro sugeridas é como segue:
1600ng/L | Padro No.5 | diluente original do padro 120μl + do padro 120μl |
800ng/L | Padro No.4 | padro 120μl diluente do padro No.5 + 120μl |
400ng/L | Padro No.3 | padro 120μl diluente do padro No.4 + 120μl |
200ng/L | Padro No.2 | padro 120μl diluente do padro No.3 + 120μl |
100ng/L | Padro No.1 | padro 120μl diluente do padro No.2 + 120μl |
Concentraço padro | Padro No.5 | Padro No.4 | Padro No.3 | Padro No.2 | Padro No.1 |
3200ng/L | 1600ng/L | 800ng/L | 400ng/L | 200ng/L | 100ng/L |
Amortecedor 20ml diluído da lavagem do concentrado 25x do amortecedor da lavagem no deionized ou água
destilada para render 500 ml do amortecedor da lavagem 1x. Se os
cristais formaram no concentrado, mistura delicadamente até que os
cristais se dissolverem completamente.
Procedimento de ensaio
1. prepare todos os reagentes, soluções padro e amostras como
instruídas. Traga todos os reagentes temperatura ambiente antes de
usar. O ensaio é executado na temperatura ambiente.
2. determine o número de tiras exigidas para o ensaio. Introduza as
tiras nos quadros para o uso. As tiras no utilizadas devem ser
armazenadas em 2-8°C.
3. adicione o padro 50μl ao padro bem. Nota: No adicione o anticorpo ao padro bem porque a soluço padro contém
o anticorpo biotinylated.
4. adicione a amostra 40μl aos poços da amostra e ento adicione o
anticorpo de 10μl anti-ANG-4 aos poços da amostra, a seguir
adicione o streptavidin-HRP 50μl aos poços da amostra e aos poços
padro (poço do controle no vazio). Misture bem. Cubra a placa com
um aferidor. Incube 60 minutos em 37°C.
5. remova o aferidor e lave a placa 5 vezes com amortecedor da
lavagem. Embeba poços com pelo menos o amortecedor da lavagem de
0,35 ml para 30 segundos a 1 minuto para cada Washington. Para a
lavagem automatizada, aspire todos os poços e lave 5 vezes com o
amortecedor da lavagem, enchendo em demasia jorra com amortecedor
da lavagem. Borre a placa nas toalhas de papel ou no outro material
absorvente.
6. adicione a soluço A da carcaça 50μl a cada um poço e adicione
ento a soluço B da carcaça 50μl a cada um bem. Incube a placa
coberta com um aferidor novo por 10 minutos em 37°C na obscuridade.
7. adicione 50μl param a soluço a cada um bem, a cor azul mudará no
amarelo imediatamente.
8. determine a densidade ótica (valor do OD) de cada um poço que
usa imediatamente um grupo do leitor do microplate a 450 nanômetro
dentro de 10 minuetos após ter adicionado a soluço da parada.
Sumário
1. prepare todos os reagentes, amostras e padrões.
2. adicione a amostra e o reagente de ELISA em cada um bem. Incube
para 1 hora em 37°C.
3. lave a placa 5 vezes.
4. adicione a soluço A e B. Incubaço da carcaça por 10 minutos em
37°C.
5. adicione param a soluço e a cor torna-se.
6. leia o valor do OD dentro de 10 minutos.
Cálculo de resultado
Construa uma curva padro traçando o OD médio para cada padro no
vertical (Y) linha central contra a concentraço no horizontal (X) a
linha central e tira uma melhor curva do ajuste através dos pontos
no gráfico. Estes cálculos podem melhor ser executados com o
software por computador do curva-encaixe e a melhor linha do ajuste
pode ser determinada pela análise de regresso.