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Thyroxine T4
Referência: Testes DS177703 96
1. Uso pretendido
Immunoassay para in vitro a determinaço quantitativa do thyroxine
no soro humano.
2. Sumário
O thyroxine da hormona (T4) é o produto principal segregado pela
glndula de tiroide e é um componente integral do sistema de
regulamento do pituitário-tiroide hipotálamo-anterior. Tem a funço
anabòlica de influenciar o metabolismo. O Thyroxine é formado em
uma reaço de acoplamento de duas moléculas de DIT
(3,5-diiodotyrosine) na glndula de tiroide. É limite armazenado ao
thyroglobulin no lumina dos folículo do tiroide e é segregado como
necessário sob a influência de TSH. (1, 2) o maior parte (> 99%)
do thyroxine total (T4) no soro esta presente na proteína?
formulário de limite. Porque as concentrações das proteínas de
transporte no soro so sujeitas aos efeitos exógenos e endógenos, o
estado das proteínas obrigatórias deve igualmente ser tomado em
consideraço na avaliaço da concentraço da hormona de tiroide no
soro. Se isto é ignorado, mudanças nas proteínas obrigatórias (por
exemplo devido hormona estrogênica? conter preparações, durante a
gravidez ou na presença de uma síndrome nephrotic etc.) pode
conduzir s avaliações errôneas do estado metabólico do tiroide. (3,
4, 5, 6, 7) a determinaço de T4 pode ser utilizada para as
seguintes indicações: a detecço de hipertireoidismo, a detecço de
hipotiroidismo preliminar e secundário, e a monitoraço da terapia
da TSH-supresso. (8)
O ensaio T4 emprega um princípio competitivo do teste com um
anticorpo dirigido especificamente contra T4. T4 endógeno, liberado
pela aço do ácido sulfonic de 8 anilino-1-naphthalene (American
National Standard).
3. Os materiais dos reagentes forneceram
• Microplate revestido, 8 X12 tiras, 96 poços, pré-revestidos com o
T4 derivant.
• Calibradores, 6 tubos de ensaio, 1 ml cada um, prontos para uso;
Concentrações: 0 (A), 2,5 (B), 5 (C), 10 (D), 15 (E) e 30 (F)
μg/dL.
• O conjugado da enzima, 1 tubo de ensaio, 6,0 ml de HRP
(peroxidase do armorácio) etiquetou o rato T4 monoclonal no
amortecedor Tris-NaCl que contém BSA (albumina de soro bovino).
Contém 0,2% preservativos ProClin300. American National Standard
1,5 mg/mL.
• Carcaça, 1 tubo de ensaio, 11ml, pronto para uso,
(tetramethylbenzidine) TMB.
• Pare a soluço, 1 tubo de ensaio, 6,0 ml de 1 mol/l de ácido
sulfúrico.
• Concentrado da soluço da lavagem, 1 tubo de ensaio, 25 ml (40X se
concentrou), soluço da lavagem do PBS-Tween.
• IFU, 1 cópia.
• Tampa da placa: 1 parte.
4. Materiais exigidos (mas no fornecido)
• Leitor de Microplate com capacidade absorvente do comprimento de
onda 450nm e 620nm.
• Arruela de Microplate.
• Incubadora.
• Abanador da placa.
• Micropipettes e micropipettes multichannel que entregam 50μl com
uma preciso de melhor de 1,5%.
• Papel absorvente.
• Água destilada
Procedimento de teste
Assegure-se de que as amostras, os calibradores, e os controles dos pacientes estejam na temperatura ambiental (℃ 18-25) antes da medida. Misture todos os reagentes com delicadamente da inverso antes do uso.
• Use somente o número de poços exigidos e formate os poços dos microplates para que cada calibrador e amostra seja analisada. • Adicione o µL 50 dos calibradores ou das amostras a cada poço.
• Adicione o µL 50 do conjugado da enzima a cada poço.
• Agite o microplate delicadamente por 30 segundos para misturar.
• Cubra a placa com uma tampa da placa e incube-a no ℃ 37 por 60 minutos.
• Rejeite os índices da micro placa pela decantaço ou pela aspiraço. Se decantando, bata e borre o seco de placa com papel absorvente.
• Adicione o µl 350 da soluço da lavagem, decante-o (torneira e mancha) ou aspire-o. Repita 4 vezes adicionais para um total de 5 lavagens. Uma arruela automatizada da tira do microplate pode ser usada. No fim da lavagem, inverta a placa e bata para fora toda a soluço residual da lavagem no papel absorvente.
• Adicione o µL 100 da carcaça a cada poço.
• Cubra e incube na temperatura ambiental (18-25℃) na obscuridade para a reaço por 20 minutos. No agite a placa após a adiço do substate. • Adicione o µL 50 da soluço da parada a cada poço.
• Agite por 15-20 segundos para misturar o líquido dentro dos poços. É importante assegurar-se de que as mudanças azuis da cor a amarelar completamente.
• Leia a absorvência de cada poço em 450 nanômetro (que usa 620 a 630 nanômetro como o comprimento de onda da referência para minimizar imperfeições boas) em um micro leitor da placa. Os resultados devem ser lidos dentro de 30 minutos da adiço param a soluço