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Aflatoxinas totais ELISA Test Kit para o tecido 96 Wells/jogo do amendoim do milho da alimentaço
1. Princípio de teste dos jogos do Mycotoxin
Este jogo é baseado no immunoassay competitivo indireto da enzima
para a detecço de aflatoxinas totais. Os antígenos conjugados so
pré-revestidos em tiras do microwell. A aflatoxina na amostra
compete com o antígeno conjugado pré-revestido na tira do microwell
para anticorpos da anti-aflatoxina. Depois que o conjugado da
enzima é adicionado, a carcaça de TMB está adicionada manchando. O
valor da densidade ótica (OD) de uma amostra é correlacionado
negativamente com a aflatoxina na amostra. Este valor é comparado a
uma curva padro, e o nível residual da aflatoxina é obtido ento.
2. Especificações técnicas
Sensibilidade: 0,02 ppb
Temperatura da incubadora: 25℃
Tempo da cultura: 30min~15min
Limite de detecço:
Alimentaço, arroz, milho, amendoim, tecido, óleo comestível 2ppb
Taxa de reaço transversal:
Aflatoxina B1 100%
Aflatoxina M1 91,2%
Aflatoxina B2 68,4%
Aflatoxina G1 4,7%
Aflatoxina G2 2,7%
Taxa de recuperaço:
Alimentaço, arroz, milho, amendoim, tecido, óleo comestível 95±35%
3. Componentes de teste dos jogos do Mycotoxin
1 | Micro-bem tiras | 12 tiras com os 8 poços removíveis cada | |
2 | soluço 6× padro (1 mL cada um) | 0ppb | 0.02ppb |
0.06ppb | 0.18ppb | ||
0.54ppb | 1.62ppb | ||
3 | Conjugado da enzima | 7ml | tampo vermelho |
4 | Soluço de funcionamento do anticorpo | 7ml | tampo azul |
5 | Carcaça A | 7ml | tampo branco |
6 | Carcaça B | 7ml | tampo preto |
7 | Pare a soluço | 7ml | tampo amarelo |
8 | 20× concentrou o amortecedor de lavagem | 40ml | tampo branco |
9 | 20× concentrou redissolving a soluço | 50ml | tampo transparente |
4. Preparaço da amostra
Instruções para o uso (os seguintes pontos devem ser tratados antes
do preprocessing)
1) A experiência pode somente usar pontas descartáveis, e as pontas
devem ser substituídas ao aspirar reagentes diferentes;
2) Antes da experiência, cada utensílio experimental deve ser
limpado e re-limpado caso necessário para evitar a contaminaço que
interfere com os resultados experimentais.
Preparaço da soluço antes do pré-tratamento da amostra:
1) Soluço da dissoluço da amostra
Use 20X de 1 partes concentrou redissolving a soluço e para
dissolver-se com 19 porções deionized a água para obter uma amostra
pronto para uso que redissolving a soluço.
2) Extrato de amostra
Use 7 porções do metanol e dissolva-as em 3 porções deionized a
água para um extrato de amostra pronto para uso.
Preparaço da amostra
4,1 preparaço de amostras do tecido, da alimentaço, do arroz e do
milho
1) 1.0±0.05g postos da amostra terra em um tubo de centrifugador
50ml, adicionam 5ml do extrato de amostra, agitaço para 3min,
centrifugador em 20°C para 10min acima de 4000r/min;
2) Tome o supernatant 100ul, adicione a amostra 700ul que
redissolving a soluço, agite-a bem;
3) Tome 50μl para testar
Fator da diluiço: 40
4,2 preparaço de amostras do óleo comestível
1) Tome a 1.0±0.05g a amostra do óleo comestível em um tubo de
centrifugador 50ml; adicione 5ml do extrato de amostra, a seguir
adicione 4ml do n-hexano, agitaço para 3min, centrifugador em
4000r/min em 20℃ para 10min;
2) Rejeite o supernatant, tome 100ul da soluço média da camada,
adicione 700ul da amostra que redissolving a soluço, e agite-o bem;
3) Tome 50μl para testar
Fator da diluiço: 40
4,3 preparaço de amostras do amendoim
1) O amendoim 1.0±0.05g posto esmagou a amostra em um tubo de
centrifugador 50ml; adicione 5ml do extrato de amostra, a seguir
adicione 4ml do n-hexano, agitaço para 3min, centrifugador em
4000r/min acima de 20℃ para 10min;
2) Rejeite o supernatant, tome 100ul da soluço média da camada,
adicione 400ul da amostra que redissolving a soluço, e agite-o bem;
3) Tome 50μl para testar
Fator da diluiço: 25
5. Procedimentos de ELISA
5,1 instruções para o uso
1) Traga reagentes de ELISA temperatura ambiente (20 - °C) 25 antes
de usar.
2) Põe o reagente de ELISA de volta a 2-8°C imediatamente depois do
uso.
3) A reprodutibilidade do processo da análise de ELISA depende pela
maior parte da consistência da lavagem da placa, e a operaço
correta da lavagem da placa é o foco de determinar o procedimento
de ELISA.
4) Durante todos os processos de incubaço da temperatura constante,
evite a luz, e sele o microplate com um filme da tampa.
5,2 procedimentos da operaço
1) Traga o jogo do teste ao minuto 30 da temperatura ambiente (℃
20-25) no mínimo, note que cada reagente deve ser agitado
uniformemente antes de usar;
2) Põe as micro-bem tiras exigidas em quadros da placa. Re-selou o
microplate no utilizado, armazenado no ℃ 2-8, no congelado.
3) Preparaço da soluço: tome o amortecedor concentrado 20× da lavagem
40ml, dissolva-o com água deionized no 1:19 (amortecedor
concentrado 20× de 1 partes da lavagem + 19 porções da água
deionized), ou prepare-o como a quantidade necessária.
4) Numeraço: número os micro-poços de acordo com amostras e a soluço
padro; cada amostra e soluço padro devem ser executadas em
duplicado; grave suas posições.
5) Adicione o padro/amostra: Adicione o µL 50 da amostra ou a soluço
padro em poços duplicados separados, a seguir adicione o conjugado
da enzima, 50 µL/well; ento soluço de funcionamento do anticorpo,
50 µL/well. Misture delicadamente agitando a placa manualmente,
selo o microplate com a membrana da tampa, incube em 25°C para o
minuto 30 na obscuridade.
6) Microplate da lavagem: Abra com cuidado o membrance da tampa,
derramam o líquido fora do microwell; adicione 250 µL/well do
amortecedor da lavagem, lave-os inteiramente por 4-5 vezes, 15-30 s
cada vez, a seguir remova-os e bata-os para secar com papel
absorvente. (Use lança no utilizada para perfurar a bolha após
seco)
7) Coloraço: adicione o µL 50 da soluço da carcaça A ento soluço de 50
µL B em cada poço. Misture delicadamente agitando a placa
manualmente, andincubate em 25°C para 15min na obscuridade para a
coloraço.
8) Determinaço: adicione 50 que o µL do para a soluço em cada poço.
Misture delicadamente agitando a placa manualmente. Ajuste o
comprimento de onda do leitor do microplate em 450 nanômetro para
determinar o valor do OD de cada poço. (Recomende ler o valor do OD
no duplo-comprimento de onda 450/630 de nanômetro dentro do minuto
5).
6. Julgamento do resultado
Há dois métodos para julgar os resultados; primeiro é o julgamento
áspero, quando o segundo for a determinaço quantitativa. Nota que o
valor do OD da amostra tem uma correlaço negativa com a aflatoxina
total na amostra.
6,1 determinaço qualitativa
A escala de concentraço (ppb) pode ser obtida pelo comparado o
valor médio da absorvência com os padrões. Supõe que valor da
absorvência da amostra uma é 0,3, a amostra dois é 1,0, e os
padrões so: 0ppb de 2,243; 0.02ppb de 1,816; 0.06ppb de 1,415;
0.18ppb de 0,74; 0.54ppb de 0,313; 1.62ppb de 0,155. Ento a
concentraço da amostra uma está na escala de 0.54ppb ~ 1.62ppb; A
amostra dois é 0.06ppb ~ 0.18ppb. A escala de concentraço da
aflatoxina total nas amostras pode ser obtida pelo multiplicado
pela diluiço correspondente da amostra.
6. Análise 2 quantitativa
A fim calcular a concentraço de amostras, uma curva padro deve ser
feita. Antes que a curva padro esteja feita, o conceito de % da
absorvência deve ser saber.
Cálculo de % da absorvência:
Porcentagem do valor da absorvência = | B | ×100% |
B0 |
Valor do OD da média de B-the da amostra ou da soluço padro.
Valor do OD da média de B0-the das 0 soluções padro de ng/mL.
O padro zero é feito assim igual a 100% e os valores da absorvência
so citados nas porcentagens. Os valores calcularam para os padrões
so entrados em um sistema de coordenadas no papel de gráfico
semilogarithmic contra o a concentraço total da aflatoxina [ng/L].
A concentraço total da aflatoxina em ng/L (ppb) que corresponde
absorvência de cada amostra pode ser lida da curva de calibraço.
Um software especial para a análise do resultado de ELISA
facilitará determinações dobro ou múltiplas. Se você precisa, chame
por favor para pedir.
7. Precauções
1) A temperatura ambiente abaixo do ℃ 25 ou a temperatura dos
reagentes e das amostras que no esto sendo retornados temperatura
ambiente (℃ 20-25) conduziro a um valor padro mais baixo do OD.
2) A seca do microplate no processo de lavagem será acompanhada das
situações que incluem as curvas padro no-lineares e a
reprodutibilidade indesejável; Continue assim ao passo seguinte
imediatamente depois da lavagem.
3) Misture uniformemente antes de adicionar algum reagente.
4) A soluço da parada é a soluço ácida sulfúrica de 2 M, evita
contactar com a pele.
5) No use o jogo que excede sua data de expiraço. O uso de reagentes
diluídos ou adulterados dos jogos conduzirá s mudanças na
sensibilidade e nos valores de detecço do OD. No troque os
reagentes dos jogos de números de lote diferentes para usar-se.
6) Armazenamento: loja no ℃ 2-8, no congelado. Põe o microplate no
utilizado em um saco da auto-selagem ao re-selo ele. A substncia
padro e a cor incolor anteriores so sensíveis luz, e assim no pode
diretamente ser exposta luz.
7) Rejeite a soluço da coloraço com toda a cor que indicar a
degeneraço desta soluço. O valor de detecço (450/630nm) das 0
soluções padro (0 ppb) de menos de 0,5 ((A450nm<0> 8) a temperatura a melhor da reaço é o ℃ 25, e as temperaturas
demasiado altas ou demasiado baixas conduziro s mudanças na
sensibilidade de detecço e em valores do OD.
8. Data do armazenamento e de expiraço
Armazenamento: loja no ℃ 2-8, no congelado.
Data de expiraço: 12 meses; a data da produço está na caixa.
Nota: Se o pacote do vácuo do microplate tem o escapamento, é ainda
válido usar-se, no afeta o resultado da análise, seja relaxar para
usar-se.
Q1: Quando será enviado?
A1: Nós enviaremos os bens para você o mais cedo possível dentro de
7 dias de trabalho após ter recebido o pagamento. (Em caso dos
fatores externos tais como a epidemia, a entrega pode ser atrasada)
Q2: Apoia OEM/ODM?
A2: Pode ser apoiado, mas a quantidade específica precisa de ser
mais de 100.000 partes, que é conveniente para produtos
personalizados.
Q3: Como sua fábrica está fazendo em termos do controle da
qualidade?
A3: Nós certificamos nacionalmente ISO9001 e ISO13485. Nosso
processo de produço conforma-se aos procedimentos padro para
assegurar a qualidade de produto a melhor.
Q4: Como proporcionar o serviço pós-venda?
A4: Nós proporcionamos o serviço pós-venda técnico em linha
profissional. Nós podemos fornecê-lo a orientaço cara-a-cara
através do vídeo, do telefone, etc.
Q5: Que é o método do pagamento?
A5: Nós recebemos o pagamento por T/T.
Q6: Como enviar?
A6: Escolha o melhor método de envio para você obtendo citações de
nossos muitos portadores cooperativos, e igualmente de navio de
acordo com suas exigências.