Estabilidade do ELISA ≤ ± 0,003Abs Teste de micotoxinas ST-2000A Faixa de comprimento de onda 400-900nm

Testador de micotoxinas ST-2000A

O analisador de micotoxinas ST-2000A é um instrumento analítico necessário para aflatoxina e ensaio imunoenzimático. O princípio do ensaio imunoenzimático de fase sólida (ELISA), nomeadamente ensaio imunoenzimático (ELISA), é composto por este instrumento e kit B1, que pode ser usado para determinar o conteúdo de aflatoxina B1 e outras micotoxinas em amostras de forma limitada e quantitativa (se equipado com outros kits, outras toxinas podem ser detectadas). É amplamente utilizado na detecço de aflatoxina B1 e outras micotoxinas em alimentos, rações, óleos, laticínios, medicamentos, bebidas, vinho e outros produtos.

Características de desempenho:

1. Operaço de exibiço: tela LCD colorida, placa de distribuiço de videofone, exibiço de informações completas da placa, operaço com tela de toque

2. Funço da placa vibratória: Velocidade da placa vibratória de nível 3, tempo 0-255 segundos ajustável

3. Estaço de trabalho: software profissional de marcador enzimático, que pode armazenar 500 grupos de programas, 100.000 resultados de amostra e fornecer modos de cálculo ricos, como absorbncia, equaço linear, equaço logarítmica, equaço quadrática, equaço cúbica, equaço logarítmica de porcentagem de concentraço de absorbncia, spline funço, taxa de inibiço, etc.

Parmetros técnicos:

Fonte de luz: lmpada halógena importada DC12V 22W

Faixa de comprimento de onda: 400-900 nm

Filtro: 405, 450, 492, 630 nm como padro, outros comprimentos de onda opcionais

Faixa de leitura: 0-4.000Abs

Resoluço: 0,001 Abs

Erro de indicaço:≤±0,01Abs

Estabilidade: ≤±0,003Abs

Repetibilidade: ≤ 0,3%

Tamanho:400mm×260mm×200mm

1 Princípio e aplicaço

Este kit utiliza o método ELISA competitivo indireto para detectar aflatoxina B1 (AFB1) em gros, rações e outras amostras. O kit é composto por placa marcada com enzima pré-revestida com antígeno de acoplamento, marcador enzimático de raiz-forte, anticorpo, padro e outros reagentes correspondentes. Durante o teste, adicione a soluço padro ou amostra, a aflatoxina B1 na amostra e a placa enzimática so pré-revestidas com o antígeno conjugado para competir pelo anticorpo anti-aflatoxina B1. Após adicionar o marcador enzimático, utilize o substrato TMB para desenvolver a cor. O valor de absorvncia da amostra está negativamente correlacionado com o teor de aflatoxina B1 contida na amostra. A quantidade residual de aflatoxina B1 na amostra pode ser obtida comparando com a curva padro.

2 Indicadores técnicos

2.1 Sensibilidade do kit: 0,03 ppb (ng/ml)

2.2 Modo de reaço:25 ℃, 30min~15min

2.3 Limite inferior de detecço:

Cereais................................................. ..... 0,15 ppb

Alimentaço com fórmula........................................ 0,3 ppb

Óleo comestível, amendoim................................... 0,6ppb

Molho de soja, trigo e outros alimentos.............................. 0,3 ppb

Cerveja................................................. 0,3 ppb

Vinho, molho de soja, vinagre................................. 0,15ppb

2.4 Taxa de reaço cruzada:

Aflatoxina B1 100%

2.5 Taxa de recuperaço de amostra:

Cereais e fórmulas alimentares............................... 85% ± 15%

Amendoim........................................ 82 ± 15%

Óleo comestível................................... 85 ± 15%

Molho de soja, trigo e outros alimentos.............................. 83 ± 15%

Cerveja.................................. 84 ± 15%

Vinho, molho de soja, vinagre............ 87 ± 15%

3 Composiço do kit

Placa marcadora de enzimas................................... 96 furos

Soluço padro (capa preta): 1ml cada

0ppb,0,03ppb,0,06ppb,0,12ppb,0,24ppb,0,48ppb

Soluço de alto padro: 100ppb.............................. 1ml

Marcador enzimático (tampa vermelha)............................... 5,5ml

Soluço de trabalho de anticorpo (tampa azul)........................ 5,5ml

Soluço de substrato A (tampa branca)........................ 6ml

Substrato líquido B (tampa preta)........................ 6ml

Soluço de terminaço (tampa amarela)........................ 6ml

Soluço de lavagem concentrada 20X (tampa branca).................... 40ml

Manual de instruções....................1cópia

4 Equipamentos e reagentes necessários

4.1 Aparelhos: testador de aflatoxina, impressora, homogeneizador, dispositivo de secagem de nitrogênio, oscilador, centrífuga, pipeta graduada, balança (sensibilidade 0,01g)

4.2 Micropipeta: canal único 20 µ l-200 µ l, 100 µ l-1000 µ l, multicanal 300 µ l

4.3 Reagente: metanol, n-hexano, triclorometano ou diclorometano

5 Pré-tratamento de amostra

5.1 Instruções antes do processamento da amostra:

O aparato experimental deve estar limpo e utilizar cabeçote de sucço descartável para evitar contaminaço e interferência nos resultados experimentais.

5.2 Preparaço da soluço:

Soluço 1: extrato de amostra

70% de metanol, ou seja, V metanol: V água desionizada＝7:3.

5.3 Amostra de etapas de pré-tratamento:

5.3.1 Método de processamento de gros

1) Pesar 2g de amostra triturada em um tubo de centrífuga de 50ml, adicionar 5ml de soluço de extraço de amostra, agitar por 5 minutos, 4000 rpm em temperatura ambiente/10 minutos de centro de separaço;

2) Pegue 0,5ml de sobrenadante, adicione 0,5ml de água deionizada e misture bem;

3) Faça uma análise de 50 μL.

Proporço de diluiço da amostra: 5 Limite inferior de detecço: 0,15ppb

5.3.2 Métodos de processamento para amostras com forte absorço de água, como casca de milho e farelo de trigo

1) Pesar 2g de amostra triturada em um tubo de centrífuga de 50ml, adicionar 20ml de soluço de extraço de amostra, agitar por 5 minutos, 4000 rpm em temperatura ambiente/10 minutos de centro de separaço;

2) Pegue 0,5ml de sobrenadante, adicione 0,5ml de água deionizada e misture bem; (Para a amostra com teor extremamente alto de toxina, ela pode ser diluída com 35% de metanol e depois testada. Por exemplo, tomar 0,1ml da soluço misturada em 2) e 0,9ml de 35% de metanol para misturar. A razo final de diluiço da amostra é 200 e o limite de detecço é 6ppb.)

3) Faça uma análise de 50 μL.

Proporço de diluiço da amostra: 20 Limite inferior de detecço: 0,6 ppb

Nota: Como a distribuiço da toxina na amostra é desigual, é necessário colher amostras de vários pontos e misturá-las totalmente antes de colher 2g para teste.

5.3.3 Método de processamento de fórmula alimentar

1) Pesar 2g de amostra triturada em um tubo de centrífuga de 50ml, adicionar 10ml de soluço de extraço de amostra, agitar por 5 minutos, 4000 rpm em temperatura ambiente/10 minutos de centro de separaço;

2) Pegue 0,5ml de sobrenadante, adicione 0,5ml de água deionizada e misture bem;

3) Faça uma análise de 50 μL.

Proporço de diluiço da amostra: 10 Limite inferior de detecço: 0,3ppb

5.3.4 Métodos de tratamento de raço com óleo comestível, amendoim e alto teor de gordura

1) Pesar 2g de amostra triturada em um tubo de centrífuga de 50ml, adicionar 8ml de n-hexano e 10ml de soluço de extraço de amostra, agitar por 5min, 4000 rpm em temperatura ambiente/10 min de centro de separaço;

2) Retire o líquido superior, pegue 0,5ml do líquido inferior e adicione 0,5ml de água deionizada, misture bem, depois pegue 0,5ml do líquido misturado e adicione 0,5ml de metanol 35%, agite por 30s;

3) Faça uma análise de 50 μL.

Proporço de diluiço da amostra: 20 Limite inferior de detecço: 0,6 ppb

5.3.5 Alimentos ou condimentos, como molhos, trigo, biscoitos, doces e métodos de processamento de rações, como concentrado de rações

1) Pesar 2g de amostra triturada em um tubo de centrífuga de 50ml, adicionar 10ml de soluço de extraço de amostra, agitar por 5 minutos, 4000 rpm em temperatura ambiente/10 minutos de centro de separaço;

2) Retirar 2ml de sobrenadante, adicionar 4ml de triclorometano (ou diclorometano), agitar por 5 minutos, 4000 rpm em temperatura ambiente/10 minutos de centro de separaço;

3) Transfira o líquido superior para outro recipiente, deixe o líquido inferior em espera, adicione mais 4ml de clorofórmio (ou diclorometano) ao líquido superior, agite totalmente e misture por 5 minutos, e a temperatura ambiente é 4000 rpm/centro de separaço para 10 minutos;

4) Retire o líquido superior, misture o líquido inferior duas vezes e misture bem;

5) Pegue 2ml do líquido inferior combinado e seque sob nitrogênio de 50-60 ℃;

6) Adicione 0,5ml de extrato de amostra para dissolver completamente a substncia seca e, em seguida, adicione 0,5ml de água deionizada para misturar;

7) Faça uma análise de 50 μL.

Proporço de diluiço da amostra: 10 Limite inferior de detecço: 0,3ppb

5.3.6 Método de processamento de cerveja

1) Mexa bem a cerveja (remova o CO2), pegue 2ml de amostra de cerveja, adicione 1ml de água destilada, adicione 7ml de metanol e agite por 5min;

2) Pegue 0,5ml de soluço de amostra mista e adicione 0,5ml de água deionizada para misturar bem;

3) Faça uma análise de 50 μL.

Proporço de diluiço da amostra: 10 Limite inferior de detecço: 0,3ppb

5.3.7 Método de tratamento de vinho, molho de soja e vinagre

1) Retire 2ml de amostra, adicione 2ml de água destilada, adicione 10ml de triclorometano (ou diclorometano), agite por 5 minutos, 4000 rpm em temperatura ambiente/10 minutos de centro de separaço;

2) Pegue 1ml do líquido inferior e seque sob nitrogênio de 50-60 ℃;

3) Adicione 0,5ml de extrato de amostra para dissolver completamente a substncia seca, depois adicione 0,5ml de água deionizada e misture bem;

5) Faça uma análise de 50 μL.

Proporço de diluiço da amostra: 5 Limite inferior de detecço: 0,15ppb

6 etapas do ELISA

Retire o reagente necessário do ambiente de armazenamento refrigerado a 4 ℃ e coloque-o em temperatura ambiente por mais de 30 minutos. Pode haver cristais que precisem ser restaurados temperatura ambiente para se dissolverem completamente quando a soluço de lavagem for armazenada a frio. Cada reagente líquido deve ser agitado antes do uso. Retire o número necessário de placas e molduras microporosas, coloque as placas microporosas no utilizadas em sacos autovedantes e armazene-as entre 2 e 8 ℃.

Antes do experimento, 20 × A soluço de lavagem concentrada é diluída na soluço de lavagem de trabalho 20 vezes.

6.1 Numeraço: numere os poços correspondentes da amostra e do padro em sequência, faça dois furos paralelos para cada amostra e padro e registre a posiço do furo padro e do furo da amostra.

6.2 Reaço de adiço de amostra: adicionar 50 µ l/poço de padro ou amostra em seus respectivos poços, depois adicionar 50 µ l/poço de marcador enzimático, em seguida adicionar 50 µ l/poço de soluço de trabalho de anticorpo, selar a placa com uma placa de cobertura membrana, agite suavemente por 5 segundos, misture e reaja a 25 ℃ por 30 minutos.

6.3 Lavagem: Remova cuidadosamente a membrana da placa de cobertura, seque o líquido no orifício, lave completamente o orifício com soluço de lavagem de trabalho 250 µ l/orifício por 5 vezes, com intervalo de 30 segundos, e seque com papel absorvente (o bolhas que no so removidas após o tapinha podem ser perfuradas com uma cabeça de pistola limpa).

6.4 Desenvolvimento de cor: adicione 50 µ l de soluço de substrato A e 50 µ l de soluço de substrato B a cada furo, agite suavemente por 5 segundos e misture bem, e desenvolva a cor no escuro a 25 ℃ por 15 minutos.

6.5 Terminaço: adicionar 50 µl de soluço de terminaço a cada furo, agitar suavemente e misturar bem para terminar a reaço.

6.6 Mediço do valor de absorço: use o testador de aflatoxina para medir o valor de absorço de cada furo a 450 nm (recomenda-se comprimento de onda duplo 450/630 nm). A determinaço deve ser concluída dentro de 10 minutos após o término da reaço

6.7 O testador automático de aflatoxina ST-2000A completa automaticamente a determinaço e produz automaticamente os resultados.

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