96 Ensaios Kit de ensaio ELISA para detecção de kanamicina de elevada reprodutibilidade

Kit de ensaio ELISA da canaamicina

Descriço do produto

REAGEN^TMO kit de ensaio ELISA da canamicina é um ensaio imunológico enzimático competitivo para a análise quantitativa da canamicina na carne/ fígado/ rim, no lisato celular, na urina, no soro e no leite.

As características únicas do kit so:

• Métodos de extracço de alta recuperaço (> 80%), rápidos (10-40 minutos) e rentáveis.

• O limite de detecço é de 0,2 ng/g.

• Alta reprodutibilidade.

• Um ensaio ELISA rápido (menos de 1 hora, independentemente do número de amostras).

Resumo do procedimento

O método baseia-se num ensaio ELISA colorimétrico competitivo.A amostra e o anticorpo de kanamicina (anticorpo n.o 1) e o HRP-conjugado (anticorpo n.o 2 conjugado com HRP) so adicionados aos poços para incubaço.Se o resíduo de kanamicina estiver presente na amostra, ele competirá com a kanamicina nos poços das placas para o anticorpo de kanamicina, o anticorpo secundário, marcado com uma enzima peroxidase,Destina-se ao anticorpo primário que é complexo para a droga revestida nos poços da placaA intensidade de cor resultante, após adiço do substrato HRP (TMB), tem uma relaço inversa com a concentraço de resíduos de kanamicina na amostra.

Conteúdo do kit, armazenagem e prazo de validade

REAGEN^TMO kit de ensaio ELISA de kanamicina tem capacidade para 96 determinações ou testes de 42 amostras duplicadas (assumindo 12 poços para padrões).Devolver os micro-cavidades no utilizados para o saco de papel alumínio e re-selar com o dessecante fornecido na embalagem original. Armazenar o kit a 2- 8°C.* O prazo de validade é de 12 meses quando o kit for conservado adequadamente.

Se no pretender utilizar o kit durante mais de 1 mês, conserve a Kanamicina Standard Stock, o Anticorpo Kanamicina #1 e o Anticorpo HRP- Conjugado #2 a - 20°C ou num congelador.

Sensibilidade (Limite de detecço)

Especificidade (reatividade cruzada)

Materiais necessários no fornecidos com o kit

• Leitor de placas de microtiter (450 nm)

• Mixer de tecidos (por exemplo, Omni Tissue Master Homogenizer)

• Misturador de vórtice (por exemplo, misturador de vórtice Genie da VWR)

• 10, 20, 100 e 1000 IU de pipetas

• Pipeta multicanal: 50-300 L (opcional)

Advertências e precauções

• Os padrões contêm Kanamicina.
• No utilize o kit após a data de validade.
• No misture reagentes de kits ou lotes diferentes, exceto para componentes com o mesmo número de peça dentro das datas de validade.
• Tente manter uma temperatura de laboratório de 20° 25° C (68° 77° F). Evite conduzir testes sob ou perto de aberturas de ar, pois isso pode causar resfriamento, aquecimento e/ou evaporaço excessivos.No execute ensaios luz solar direta, uma vez que isto pode causar calor e evaporaço excessivos.Os bancos frios devem ser evitados colocando várias camadas de toalha de papel ou outro material isolante sob as placas de ensaio durante a incubaço..
• Certifique-se de utilizar apenas água destilada ou desionizada, uma vez que a qualidade da água é muito importante.
• Ao pipetar amostras ou reagentes numa placa de microtiter vazia, colocar as pontas da pipeta no canto inferior do poço, em contacto com o plástico.
• As incubações das placas de ensaio devem ser cronometradas com a maior preciso possível.
• Adicionar padrões placa apenas na ordem de baixa concentraço para alta concentraço, pois isso minimizará o risco de comprometer a curva padro.
• Manter sempre as placas refrigeradas em sacos selados com um dessecante para manter a estabilidade.Prevenir a formaço de condensaço nas placas, permitindo-lhes equilibrar- se temperatura ambiente (20°C / 68°F) enquanto esto na embalagem.

Certifique-se de que as amostras so armazenadas adequadamente. Em geral, as amostras devem ser refrigeradas a 2-4°C durante no mais de 1-2 dias. Congelar as amostras a um mínimo de -20°C se precisar de serem armazenadas por um período mais longo.As amostras congeladas podem ser descongeladas a temperatura ambiente (20 25 ° C / 68 77 ° F) ou numa geladeira antes de serem utilizadas.

• Preparaço de 1 × diluente da amostra:Misturar 1 volume de 10 × diluente da amostra com 9 volumes de água destilada.
• Preparaço 1 ×Amostragem Ext. tampo: Misturar 1 volume de tampo de 10 × Amostra Ext. com 9 volumes de água destilada.

Lisato de célula

• Tomar 100 I.L. de lisato celular, adicionar 900 I.L. de tampo diluente de 1 × amostra, misturar bem.

• Centrifugar durante 5 minutos a 4000 x g.

• Para o ensaio, tomar 50 litros de supernatante por poço.

Nota: Fator de diluiço: 10.

Camaro/Peixe/carne/Fígado/Rins

• A 1,0 g da amostra homogeneizada, adicionar 4,0 ml de tampo 1 × Ext.

• Vortex a amostra durante 1 minuto com misturador de vórtice.

• Centrifugar a amostra durante 5 minutos a 4.000 x g.

• Transferir cuidadosamente 200 uL da camada superior para um novo tubo,adicionar 1.375 mL de 1X diluente de amostra e 25 uL de tampo de equilíbrio de amostra, vórtice durante 30 segundos.

• Para o ensaio, utilizar 50 uL por poço.

Notas: Fator de diluiço: 40.

Urina/sério

• Retirar 50 uL de amostra de urina ou soro, adicionar 1,2 ml de 1X diluente de amostra, misturar bem.

• Centrifugar durante 5 minutos a 4.000 x g.

• Retirar 50 uL do supernatante por poço para o ensaio.

Nota: Fator de diluiço: 25.

Leite

• Adicionar 100 uL de amostra de leite a um tubo de centrífuga, adicionar 900 uL de 1X de diluente da amostra.
• Vortex vigorosamente durante 30 segundos.
• Centrifugar a 4.000 x g durante 10 minutos.
• Para o ensaio, utilizar 50 uL da amostra de supernatante.

Nota: Fator de diluiço:10

Protocolo do Kit de Teste de KANAMYCIN ELISA

Preparaço do reagente

IMPORTANTE: Todos os reagentes devem ser submetidos temperatura ambiente antes da utilizaço (1 2 horas no20 ¢ 25°C / 68 ¢ 77°F); Certifique- se de ler a secço " Advertências e precauções "Página3.As soluções devem ser preparadas pouco antes do ensaio ELISA. Todos os reagentes devem ser misturados por inverso ou redemoinho suave antes da utilizaço. Preparar os volumes necessários para o número de poços em funcionamento.No devolver os reagentes aos tubos/garrafas originaisO uso de reservatórios descartáveis ao manipular reagentes pode minimizar o risco de contaminaço e é recomendado.

• Preparaço da soluço 1X de lavagem

Misturar 1 volume da soluço de lavagem 20X com 19 volumes de água destilada.

Protocolo de ensaio ELISA

Marcar as tiras individuais que sero utilizadas e os reagentes aliquotados como exemplo:

• Adicionar 50 I.L. de cada um dos Standards de Canamicina em duplicado em poços diferentes (Adicionar os Standards placa apenas na ordem de baixa concentraço para alta concentraço).

• Adicionar 50 litros de cada amostra em duplicado em poços de amostragem diferentes.

• Adicione 50 I.L. de HRP-Conjugated Ab#2 a cada poço e 50 I.L. de Anticorpo #1 de Kanamicina a cada poço.

• Incube o prato durante 30 minutos a temperatura ambiente (20 ¢ 25°C / 68 ¢ 77°F). (Evitar a luz solar direta e bancos frios durante a incubaço (recomenda-se cobrir a placa de microtiter durante a incubaço).

• Lave o prato 4 vezes com 250 I.L. de 1 X Soluço de Lavar. Após a última lavagem, inverta o prato e bata suavemente o prato para secar em toalhas de papel (Faça o próximo passo imediatamente após a lavagem dos pratos.No permitir que a chapa seque ao ar entre as etapas de trabalho).

• Adicione 100L de substrato de TMB. Tempo da reaço imediatamente após a adiço do substrato. Misture a soluço balançando suavemente a placa manualmente por 30s enquanto incubaçoQualquer soluço de substrato que apresente coloraço indica deterioraço e deve ser descartada.Recomenda-se cobrir a placa de microtiter durante a incubaço).

• Após incubaço durante 15 minutos a temperatura ambiente (20 ¢ 25°C / 68 ¢ 77°F), adicionar 100 I.U. de tampo para parar a reacço enzimática.

• Leia a placa o mais rapidamente possível após a adiço do tampo de parada num leitor de placas com comprimento de onda de 450 nm (Antes da leitura,utilizar uma toalha sem pêlos na parte inferior da placa para garantir que a umidade ou as impressões digitais no interferem com as leituras).

Cálculos da concentraço de kanamicina

Uma curva padro pode ser construída através do gráfico da absorço relativa média (%) obtida a partir de cada padro de referência em relaço sua concentraço em ng/mL numa curva logarítmica.

Absorço relativa (%) =padro de absorço zeroou amostra x 100

Para determinar a concentraço correspondente do medicamento testado em ng/mL a partir da curva padro, utilizar os valores de absorço relativa média para cada amostra.

A figura a seguir é uma curva padro típica do cloramfenicol.