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REAGENTMFuraltadona ((AMOZ) ELISA Test Kit fornece um enzima imunotest competitivo para a análise quantitativa de furaltadona em peixe, camaro, carne (frango, carne bovina, carne de porco e hepar), ovos, mel.
Métodos de extracço rápidos (4 horas), de elevada recuperaço (80-105%) e de baixo custo para várias amostras.
Alta sensibilidade (0,05 ng/g ou ppb) e baixo limite de detecço (0,1 ng/g ou ppb) para várias amostras.
Alta reprodutibilidade.
Um ensaio ELISA rápido (menos de 1 hora, independentemente do número de amostras).
O método baseia-se num ensaio ELISA colorimétrico competitivo. O AMOZ-BSA foi revestido nos poços das placas.A amostra e o anticorpo AMOZ so adicionados juntamente com o anticorpo secundárioSe o resíduo de AMOZ estiver presente na amostra, competirá pelo anticorpo AMOZ,impedindo assim que o anticorpo se ligue ao AMOZ-BSA ligado ao poçoA intensidade de cor resultante, após adiço do substrato HRP (TMB), tem uma relaço inversa com a concentraço de resíduos de AMOZ na amostra.
REAGENTMO kit de ensaio ELISA de furaltadona (AMOZ) tem capacidade para 96 determinações ou testes de 42 amostras duplicadas (assumindo 12 poços para padrões).Devolver os micro-cavidades no utilizados para o saco de papel alumínio e re-selar com o dessecante fornecido na embalagem original. Conservar o kit a 2- 8°C.* O prazo de validade é de 12 meses quando o kit estiver devidamente armazenado.
Conteúdo do kit | Montante | Armazenamento |
Placa revestida por AMOZ | 1 placa de 96 poços (8 poços x 12 tiras) | 2-8°C |
Padrões AMOZ: Controle negativo (tubo com tampa branca) 00,0 5 ng/ml (tubo amarelo) 00,15 ng/mL (tubo de tampa laranja) 00,45 ng/mL (tubo com tampa cor-de-rosa) 1.35 ng/mL (tubo de tampa roxa) 40,05 ng/mL (tubo com tampa azul) 10 ng/mL (spiking, opcional, tubo com tampa vermelha) | 1.5 ml 1.5 ml 1.5 ml 1.5 ml 1.5 ml 1.5 ml 1.5 ml | 2-8°C 2-8°C |
AMOZ Anticorpo (Anticorpo#1) | 4 ml | |
Anticorpo conjugado HRP #2 | 6 ml | 2-8°C |
10X Buffer de extracço de amostras | 25 ml | |
20X Soluço de lavagem | 28 mL | |
Parar tampo | 20 ml | |
Substrato TMB | 12 ml | |
50 mM de 2-nitrobenzaldeído | 20,0 ml |
* Se no pretende utilizar o kit durante mais de 1 mês, conserve o Antibody #1 e o HRP- Conjugated Antibody #2 a - 20°C ou num congelador.
Sensibilidade (Limite de detecço)
Tipo de amostra | Limite de detecço(ng/g ou ppb) |
Peixes/Camarões | 0.1 |
Carne (frango, carne bovina, carne de porco e hepar) | 0.1 |
Potência dos ovos | 0.1 |
Querida. | 0.1 |
Analíticos | Reatividade cruzada(%) |
Amós | 100 |
AOZ | < 0.04 |
AHD | < 0.06 |
SEM | < 0.05 |
1Leitor de placas de microtiter (450 nm)
2- Incubadora.
3. Misturador de tecidos (por exemplo, Omni TissueMaster Homogenizer)
4Evaporador rotativo ou gás nitrogénio
5. Misturador de vórtices (por exemplo, misturador de vórtices Gneie da VWR)
6.10, 20, 100 e 1000 ml de pipetas
7.Pipeta multicanal: 50-300 ml (opcional)
8.Acetato de etilo
9.0.1 M K2HPO4
10.n-hexano (ou n-heptano)
11.1M NaOH
12.1M HCL
Os padrões contêm Furaltadone.
No utilize o kit após a data de validade.
No misture reagentes de kits ou lotes diferentes, exceto para componentes com o mesmo número de peça dentro das datas de validade.
Tente manter uma temperatura de laboratório de 20° 25° C (68° 77° F). Evite conduzir testes sob ou perto de aberturas de ar, pois isso pode causar resfriamento, aquecimento e/ou evaporaço excessivos.No execute ensaios luz solar direta, uma vez que isto pode causar calor e evaporaço excessivos.Os bancos frios devem ser evitados colocando várias camadas de toalha de papel ou outro material isolante sob as placas de ensaio durante a incubaço..
Certifique-se de utilizar apenas água destilada ou desionizada, uma vez que a qualidade da água é muito importante.
Ao pipetar amostras ou reagentes numa placa de microtiter vazia, colocar as pontas da pipeta no canto inferior do poço, em contacto com o plástico.
As incubações das placas de ensaio devem ser cronometradas com a maior preciso possível.
Adicionar padrões placa apenas na ordem de baixa concentraço para alta concentraço, pois isso minimizará o risco de comprometer a curva padro.
Manter sempre as placas refrigeradas em sacos selados com um dessecante para manter a estabilidade.Prevenir a formaço de condensaço nas placas, permitindo-lhes equilibrar- se temperatura ambiente (20°C / 68°F) enquanto esto na embalagem.
Certifique-se de que as amostras esto devidamente armazenadas. Em geral, as amostras devem ser refrigeradas a 2-4°C durante no mais de 1-2 dias.As amostras congeladas podem ser descongeladas a temperatura ambiente (20 25 ° C / 68 77 ° F) ou numa geladeira antes de serem utilizadas.
Misturar 1 g da amostra homogeneizada com 0,5 ml de tampo de extracço de amostra de 1 x, 3,5 ml de água destilada, 0,5 ml de 1 M HCl e 20 ml de 50 mM de 2-nitrobenzaldeído, por vortexagem durante 30 segundos.
Incubaço a 50°C - 55°C durante 3 horas.
Adicionar 5 ml de 0,1 M K2HPO4, 0,4 ml de 1 M NaOH e 6 ml de acetato de etilo, em vórtice durante 2 minutos.
Centrifugar a 4.000 x g durante 5 minutos a temperatura ambiente (20°C 25°C).
Transferir 3 ml do supernatante de acetato de etilo (correspondente a 0,5 g da amostra original) para um novo frasco para injectáveis (F Evite a camada aquosa inferior!centrifugar o acetato de etilo extraído durante 5 minutos a 4Se a emulso ocorrer e a camada superior de acetato de etilo for inferior a 3 ml, incubar a amostra num banho de água durante 3 minutos a 85 °C.Usar um evaporador rotativo para secar a amostra num banho de água de 60 a 70 °C sob presso reduzidaAlternativamente, a amostra pode ser secada soprando gás nitrogénio num banho de água a 60°C.
Dissolver o resíduo seco em 1 ml de n-hexano (ou n-heptano).
Adicionar 1 ml de1XBuffer de extracço de amostra, torná-la em vórtice durante 2 minutos.
Centrifugar a amostra a 4.000 x g durante 10 minutos a temperatura ambiente (20°C / 68°F).
Para o ensaio, utilizar 50 ml da camada aquosa inferior por poço.
Nota:Fator de diluiço: 2. Para evitar um fundo elevado, recomenda-se preparar uma amostra em branco de solvente em paralelo,Começando pela reduço de 3 ml de acetato de etilo até secar e prosseguindo com o procedimento de extracço em repousoSubtrair o resultado do controlo com solvente dos resultados da amostra.
Misturar 1 g da amostra homogeneizada com 0,5 ml de tampo de extracço de amostra 1X, 3,5 ml de água destilada, 0,5 ml de 1 M HCl e 20 ml de 50 mM de 2-nitrobenzaldeído, por vortexagem durante 30 segundos.
Incubaço a 50°C - 55°C durante 3 horas. Vortex da amostra durante 5 segundos a cada hora durante a incubaço.
Adicionar 5 ml de 0,1 M K2HPO4, 0,4 ml de 1 M NaOH e 6 ml de acetato de etilo, em vórtice durante 5 minutos.
Centrifugar a 4.000 x g durante 5 minutos a temperatura ambiente (20°C / 68°F).
Transferir 3, 0 ml do supernatante de acetato de etilo (correspondente a 0,5 g da amostra original de ovo) para um novo frasco para injectáveis (F Evite a camada aquosa inferior!centrifugar o acetato de etilo extraído durante 5 minutos a 4Utilize um evaporador rotativo para secar a amostra num banho de água de 60 a 70 °C sob presso reduzida.A amostra pode ser secada soprando gás nitrogénio num banho de água de 60 a 70 °C.
Dissolver o resíduo seco em 1 ml de n-hexano (ou n-heptano).
Adicionar 1 ml de1XExtraço de amostra tampo e vórtice da amostra durante 2 minutos.
Centrifugar a amostra a 4.000 x g durante 10 minutos a temperatura ambiente (20°C / 68°F).
Para o ensaio, utilizar 50 ml da camada aquosa inferior por poço.
NotasFator de diluiço: 2. Para evitar um fundo elevado, recomenda-se preparar uma amostra em branco de solvente em paralelo.começando pela reduço de 3 ml de acetato de etilo até secura e prosseguindo com o procedimento de repousoSubtrair o resultado do controlo com solvente dos resultados da amostra.
Misturar 1 g da amostra de ovo com 0,5 ml de tampo de extracço de amostra 1X, 3,5 ml de água destilada, 0,5 ml de 1 M HCl e 20 ml de 50 mM de 2-nitrobenzaldeído, por vortexagem durante 2 minutos.
Incubaço a 50°C - 55°C durante 3 horas.
Adicionar 5 mL de 0,1 M K2HPO4, 0,4 mL de 1 M NaOH e 6 mL de acetato de etilo, vórtice 5 minutos velocidade máxima.
Centrifugar a 4.000 x g durante 10 minutos a temperatura ambiente (20°C / 68°F).
Transferir 3, 0 ml do supernatante de acetato de etilo (correspondente a 0,5 g da amostra original de mel) para um novo frasco para injectáveis (F Evite a camada aquosa inferior!centrifugar o acetato de etilo extraído durante 5 minutos a 4Utilize um evaporador rotativo para secar a amostra num banho de água de 60 a 70 °C sob presso reduzida.A amostra pode ser secada soprando gás nitrogénio num banho de água de 60 a 70 °C.
Dissolver o resíduo seco em 1 ml de n-hexano (ou n-heptano).
Adicionar 1 ml de1XAmostra de extracço tampo e vórtice por 2 minutos.
Centrifugar a amostra a 4.000 x g durante 10 minutos a temperatura ambiente (20°C / 68°F).
Utilize 50 ml da camada aquosa inferior para o ensaio.
Notas: Fator de diluiço: 2. (1) Após a evaporaço do extrato de acetato de etilo, o resíduo resultante no é completamente dissolvido.(2) Para esta preparaço, recomendamos utilizar 0,5 ng/g ou ppb padro como valor de corte para amostras positivas, uma vez que as amostras negativas podem apresentar efeitos de fundo consideráveis (em alguns casos entre as normas 0.05 ng/g e 00,15 ng/g).