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REAGENTMO kit de ensaio ELISA da estreptomicina é um ensaio imunológico enzimático competitivo para a análise quantitativa da estreptomicina e da diidrostreptomicina nos alimentos para animais, no mel, nos rins, no fígado, na carne (carne de bovino, de frango e de suíno),leite, soro e urina.
Tipo de amostra | Limite de detecço(ng/g ou ppb) |
Alimentos para animais | 5 |
Querida. | 2 |
Carne/Fígado/Rins | 5 |
Leite | 1 |
Leite em pó | 1 |
Sério/Urinos | 0.5 |
Analíticos | Reatividade cruzada (%) |
Streptomicina | 100 |
Métodos de extracço rápidos (10 a 30 minutos) e sem reagente orgnico para várias amostras com recuperaço elevada (75 a 115%).
Alta sensibilidade (0,05 ng/g ou ppb) e baixo limite de detecço (1 ng/g ou ppb para carne e leite).
Alta reprodutibilidade.
Um ensaio ELISA rápido (menos de 2 horas, independentemente do número de amostras).
O método baseia-se num ensaio ELISA colorimétrico competitivo. O anticorpo da estreptomicina foi revestido nos poços da placa.A amostra é adicionada juntamente com o conjugado de peroxidase estreptomicina-rabaneteSe o resíduo de estreptomicina estiver presente na amostra, ele competirá pelo anticorpo de estreptomicina, impedindo assim que a estreptomicina-HRP se ligue ao anticorpo ligado ao poço.A intensidade de cor resultante, após adiço do substrato de HRP (TMB), tem uma relaço inversa com a concentraço de resíduos de estreptomicina na amostra.
Marcar as tiras individuais que sero utilizadas e os reagentes aliquotados como exemplo:
Componente | Volume por reaço | 24 Reacções |
Anticorpo da estreptomicina #1 | 50 ml | 1.2 ml |
Anticorpo conjugado HRP #2 | 50 ml | 1.2 ml |
1X Soluço de lavagem | 20,0 ml | 48 ml |
Parar tampo | 100 ml | 2.4 ml |
Substrato TMB | 100 ml | 2.4 ml |
Adicionar 50 uL de cada Streptomycin Standards em duplicado em poços diferentes (FAdicionar padrões placa apenas na ordem de baixa concentraço a alta concentraço).
Adicionar 50 litros de cada amostra em duplicado em poços de amostragem diferentes.
Adicionar 50 I.U. de anticorpos HRP-conjugados #2 e 50 ml de anticorpos #1 a cada poço, misturar bem balançando suavemente a placa manualmente durante 1 minuto.
Incube o prato durante 30 minutos a temperatura ambiente (20 ‡ 25°C / 68 ‡ 77°F) (- O quê? FEvitar a luz solar direta e bancos frios durante a incubaço (recomenda-se cobrir a placa de microtiter durante a incubaço).
Lavar a placa 5 vezes com 250 I.L. de 1 X Soluço de Lavagem.FRealizar a próxima etapa imediatamente após a lavagem dos pratos.
Adicionar 100 I.L. de substrato de TMB. Tempo da reaço imediatamente após a adiço do substrato. Misturar a soluço agitando suavemente a placa manualmente durante 1 minuto enquanto incuba (- O quê? FQualquer soluço de substrato que apresente coloraço indica deterioraço e deve ser descartada.Recomenda-se cobrir a placa de microtiter durante a incubaço).
Após a incubaço durante 15 minutos a temperatura ambiente (20°C / 68°F), adicionar 100 L de Stop Buffer para parar a reacço enzimática.
Leia a placa o mais rapidamente possível após a adiço do tampo de parada num leitor de placas com comprimento de onda de 450 nm (FAntes da leitura, utilizar uma toalha sem pêlos no fundo da placa para garantir que a humidade ou as impressões digitais no interferem com as leituras).