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Jogo ácido nucleico principal amarelo da detecço do vírus (YHV) (método RT-PCR-fluorescente da ponta de prova)
Uso pretendido:
Este jogo é apropriado para a detecço específica do vírus principal amarelo patogênico (YHV) em amostras de tecido tais como brnquias, glndulas das antenas, tecidos hematopoietic e órgos linfáticos do camaro de penaeus.
Princípio:
Este jogo usa o RNA como um molde e as primeiras demo como um ponto
de partida para sintetizar as costas do cDNA complementares ao
molde do RNA sob a aço do transcriptase reverso de grande eficacia.
Escolha a ponta de prova específica do projeto conservador do gene
do vírus do cálice do gato, a ponta de prova pode com área da
amplificaço da primeira demo no meio de um molde obrigatório
específico do ADN, em processo da extenso do PCR, as enzimas
limitadas da polimerase de Taq do 5" extremidade de grupos
fluorescentes na ponta de prova será reduzido, feito livre no
sistema de reaço, extinguindo desse modo grupos fora do 3"
extremidade, o fulgor, o ácido nucleico da cabeça que amarela do
camaro o vírus (YHV) foi detectado pelo PCR da fluorescência em um
sistema de reaço completamente fechado.
Componentes principais:
Componente | Especificaço |
Líquido da reaço do PCR | 24 tubos |
Controle positivo | 1 tubo |
Controle negativo | 1 tubo |
1. Tipo da amostra
Amostras de tecido do camaro
2. Coleço da amostra
As amostras foram recolhidas de acordo com SNT 1151.4-2003.
Tome o tecido fresco do camaro como a amostra.
2,1 para larvas ou o camaro novo, o camaro ou as cabeças inteiras do camaro so tomados como amostras. Para remover a cabeça, usar tesouras da esterilizaço e pinça para remover os olhos, o breastplate, todos os anexos torácicos, e abdômen atrás da cabeça.
2,2 para o camaro adulto, os filamentos da brnquia, os órgos linfáticos ou o hemolymph foram tomados como amostras.
3. Preservaço da amostra
Pode ser armazenado por 24 horas em 2℃~8℃, e pode ser armazenado por muito tempo em -20℃.
Amplificaço do PCR e detecço da fluorescência (área da detecço do PCR):
Põe cada tubo da reaço no instrumento do PCR e execute a amplificaço do PCR de acordo com os seguintes procedimentos:
Etapa | Número de ciclo | Temperatura | Tempo |
1 | 1 | 50℃ | 20min |
2 | 1 | 95℃ | 2min30s |
3 | 45 | 95℃ | 10s |
60℃ | 30s recolhem o fluorescente |
FAM é selecionado para os canais da detecço.
Controle da qualidade:
Os resultados da interpretaço
Resultados | Valor do Ct |
Positivo | Ct≤38 |
Negativo | Nenhum valor do Ct ou Ct value≥45 |
Área de cinza | 38<Ct<45> |
Nota: O resultado é julgado para ser a área cinzenta, que precisa de ser verificada novamente. Se verifique novamente o resultado é valor do Ct < 45="" is="" considered="" as="" positive="">
Índice do desempenho de produto:
1. Preciso
Os materiais de referência positivos de empresas de teste eram toda positivos.
2. Limite de detecço mínimo: o limite de detecço deste jogo é 10copies/μL.
3. Preciso: O coeficiente de variaço (CV, %) do valor do Ct da preciso do intra-grupo é ≤5%.
4. Coeficiente de correlaço linear, linear | r | > 0,980.
Os detalhes da operaço satisfazem verificam de IFU!