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Kit de detecço de ácido nucleico do vírus Monkeypox (MPV) (método de PCR em tempo real)
[Especificaço do pacote]
50 testes/kit e 200 testes/kit
[Uso pretendido]
Este kit é usado para a detecço de Monkeypox Virus (MPV) em
amostras de soro ou exsudato de leso usando reais
sistemas de PCR de tempo.
[Componentes do Kit de Diagnóstico]
No. | Nome do reagente | Especificaço e quantidade | |
50T | 200T | ||
1 | MPV PCR Mix | 750μl × 1 tubo | 750μl × 4 tubos |
2 | Mistura de Enzimas MPV | 200μl × 1 tubo | 200μl × 4 tubos |
3 | Controle interno (IC) | 100μl × 1 tubo | 100μl × 4 tubos |
4 | Controle Negativo MPV | 100μl × 1 tubo | 100μl × 4 tubos |
5 | Controle Positivo MPV | 100μl × 1 tubo | 100μl × 4 tubos |
6 | Instruções | 1 porço | 1 porço |
[Teste Método]
1. Reagente Preparaço(realizado no “reagente preparaço regio”)
1.1 Retire cada componente do kit de diagnóstico e coloque-os temperatura ambiente.Permita que os reagentes se equilibrem temperatura ambiente e agite cada um deles, respectivamente, no vórtice para uso posterior.
1.2 De acordo com a quantidade de corpos de prova, Controle Positivo MPV, Controle Negativo MPV e Controle Interno (IC),
pipetar a quantidade apropriada de MPV PCR Mix e MPV Enzyme Mix (MPV PCR Mix 15 μl/teste +MPV Enzyme Mix 4 μl/teste +Controle interno (IC) 1 μl/teste), misture-os completamente para fazer um PCR-Mastermix, centrifugue-o instantaneamente para uso posterior.
Nome do reagente | 1 Amostra | 10 Amostra | 25 Amostra | 50 amostras | 100 amostras | 200 Amostra |
MPV PCR Mix (μl) | 15 | 150 | 375 | 750 | 1500 | 3000 |
Mistura de Enzimas MPV (μl) | 4 | 40 | 100 | 200 | 400 | 800 |
Controle interno (CI) | 1 | 10 | 25 | 50 | 100 | 200 |
PCR-Mastermix | 20 | 200 | 500 | 1000 | 2000 | 4000 |
Nota: A configuraço acima é apenas para sua referência e para garantir um volume suficiente do PCR-Mastermix, pode ser necessário mais volume da pipetagem real. |
1.3 Transfira os reagentes preparados acima para a “regio de processamento de amostra” para uso posterior.
2. Em processamento e carregando do espécimes (realizado no “espécime em processamento regio”)
2.1 Este kit de diagnóstico no inclui o kit de extraço de RNA e DNA viral.Recomenda-se usar o kit de extraço de RNA e DNA viral produzido pela Changsha Renji Medical Equipment Co., Ltd. para extrair o DNA viral.A operaço específica está de acordo com suas instruções.
2.2 Adicione 20μl de PCR-Mastermix no tubo de reaço de PCR com 5μl acima da amostra processada, Controle Positivo MPV e Controle Negativo MPV e tampe o tubo.Realize a detecço de PCR quantitativa de fluorescência no instrumento de PCR de fluorescência.
3.PCR Amplificaço (realizado no “nucléico amplificaço de ácido área”)
3.1 Coloque os tubos de reaço de PCR nos poços de amostras do equipamento de amplificaço.Configure o MPV Positive Control, o MPV Negative Control e as amostras a serem testadas na sequência correspondente e introduza o nome da amostra.
3.2 Defina os parmetros do ciclo de acordo com a tabela a seguir para amplificaço por PCR.
Passos | Etapa de reaço | Temperatura | Tempo | ciclos |
1 | Reaço Enzimática UNG | 50℃ | 2 minutos | 1 |
2 | Reaço Enzimática TAQ | 95℃ | 3min | 1 |
3 | Deformaço | 95℃ | 10s | 40 |
anelamento | 55℃ | 30s* |
Nota: 1) A coleta de fluorescência é definida como "Etapa 3: 55 ° C, 30s".Seleço de canais de detecço: FAM e Cy5, onde o canal FAM é o gene alvo, o canal Cy5 é o gene de controle interno (IC) e o sistema de reaço é definido para 25 μl.
2) Os instrumentos de PCR fluorescente da série ABI no selecionam a calibraço ROX e selecionam Nenhum para o grupo de extinço.