A detecção do jogo FAM do teste do PCR de Monkeypox do tempo real canaliza o transporte congelado da circunstância

Especificaço

ÍNDICE DO DESEMPENHO DE PRODUTO
1. sensibilidade: 200 copies/mL.
2. especificidade: Nenhuma reaço transversal com o vírus do enterovírus (EV), de sarampo (milivolt), o vírus da rubéola (rv), o vírus do Varicella-zoster (VZV), o vírus de dengue (DenV), o vírus humano de Parvovirus B19 (HPVB19), de Epstein-barr (EBv), o vírus de herpes humano 6 (HHV-6), etc.
3. preciso: ≤ 5% do CV.

PROCEDIMENTOS

1. Preparações da amostra
A extraço do ADN das amostras clínicas é conduzida de acordo com as exigências e os procedimentos correspondentes no jogo da extraço do ADN do vírus. Extraído

O ADN pode diretamente ser usado para a detecço. Se a amostra no é detectada imediatamente depois da extraço, deve ser armazenada em -70°C para o apoio, evitando ciclos repetidos da gelo-aproximaço amigável.

2. Preparaço do sistema de reaço
(1) preparaço do sistema: Remova o reagente do jogo, e permita-o aproximaço amigável completamente na temperatura ambiente. Inverta a mistura e o centrifugador imediatamente. As reações do teste de N (N = número de amostras a ser testadas + controle positivo + controle negativo + 1) so preparadas para sistemas de reaço, respectivamente, como segue.

(2) distribuiço de sistema da reaço: Misture bem o amortecedor acima da reaço, centrifugador, e dispense 15μL das partes alíquota nos tubos do PCR apropriados para o instrumento fluorescente do PCR. (Centrifugue os tubos do PCR em 6,000rpm para que 30s e o transporte prove a zona do tratamento.)

3. Carga da amostra (zona do tratamento da amostra)
Adicione a amostra 10μL ácida nucleica, o controle negativo e o controle positivo aos tubos acima do PCR respectivamente. Tampe os tubos firmemente e o centrifugador em 6,000rpm para 10s e ento o transporte zona da amplificaço do PCR.
* precauço: Adicionar amostras na seguinte ordem é
recomendou: amostra ácida nucleica do control-> negativo - > controle positivo.
 

4. Amplificaço do PCR (zona da amplificaço do PCR)
4,1 põe os tubos caped do PCR na máquina do PCR do tempo real para a amplificaço.
4,2 ajuste da condiço do ciclo do PCR da fluorescência

Recolha sinais fluorescentes no ℃ do 3:60 da etapa; 35s para ABI 7500, 20s para SLAN-96S/96P, quando 13s para outros sistemas do PCR do tempo real. O volume total: 25μL.

4,3 eliminaço após a detecço
Dispõe os tubos do PCR em um saco selado após a reaço e trate os tubos usados como desperdícios médicos.
 

5. Ajustes para a análise do resultado
Ajuste a linha de base em uma regio antes da amplificaço exponencial onde os sinais fluorescentes de todas as amostras so relativamente estáveis (nenhumas flutuações significativas em todas as amostras); ajuste o ponto de partida (número de ciclo) longe das flutuações do sinal em começar
fase de coleço da fluorescência; ajuste o valor-limite (número de ciclo) 1~3 ciclos antes do Ct da primeira amostra para incorporar a amplificaço exponencial. 4~15 ciclos so recomendados.
Ajuste o direito do ponto inicial acima do ponto o mais alto da curva negativa da amplificaço do controle (curva irregular do ruído).
 

6. Critérios do controle da qualidade
Antes de avaliar os resultados do espécime, o controle positivo e o controle negativo devem ser interpretados usando a tabela da interpretaço abaixo, e o controle positivo e a curva negativa do controle devem ser executados corretamente, se no o resultado da amostra é inválido.

7. Interpretaço dos resultados da análise
Os canais para o vírus de Monkeypox, resultado de FAM da detecço devem ser interpretados como abaixo.
a) positivo: O ≤ 38 do Ct e a curva da amplificaço S-so dados forma.
b) suspeitou: 38 < Ct=""> 40 ou ≤ nulo 35 do Ct e do Ct no canal de VIC para o segundo teste.
c) negativo: Ct > 40 ou ≤ nulo 35 do Ct e do Ct no canal de VIC.
d) contraprova: Ct > 40 ou Ct nulo e Ct > 35 no canal de VIC.