[Princípio de teste]
O princípio da detecção em tempo real é baseado no ensaio de 5'nuclease fluorogênica.Durante a reação de PCR, a DNA polimerase cliva a sonda na extremidade 5' e separa o corante repórter do corante supressor somente quando a sonda hibridiza com o DNA alvo.Essa clivagem resulta no sinal fluorescente gerado pelo corante repórter clivado, que é monitorado em tempo real pelo sistema de detecção de PCR.O ciclo de PCR no qual um aumento no sinal de fluorescência é inicialmente detectado é proporcional à quantidade do produto de PCR específico.O monitoramento das intensidades de fluorescência em tempo real permite a detecção do produto acumulado sem a necessidade de reabrir o tubo de reação após a amplificação.O Kit de PCR em tempo real Monkeypox Virus contém um sistema específico pronto para uso para a detecção do Monkeypox Virus por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR) no sistema de PCR em tempo real.O master contém reagentes e enzimas para a amplificação específica do DNA do Monkeypox Virus.A fluorescência é emitida e medida pela unidade óptica do sistema de tempo real durante a PCR.A detecção do fragmento de DNA amplificado do Monkeypox Virus é realizada no canal do fluorímetro FAM com o supressor fluorescente BHQ1.O tampão de extração de DNA está disponível no kit e as amostras de soro ou exsudato da lesão são usadas para a extração do DNA.Além disso, o kit contém um sistema para identificar possível inibição da PCR por meio da medição da fluorescência Cy5 do controle interno (IC).É fornecido um controle positivo externo definido como 1×10 7cópias/ml que permite a determinação da carga gênica.

[Componentes do Kit de Diagnóstico]

Observação:1. Não misture ou troque componentes de diferentes lotes de kits.

2. O Controle Negativo MPV é água livre de nuclease estéril e gene de Controle Interno (IC), e o Controle Positivo MPV é DNA in vitro que contém genes alvo e gene de Controle Interno (IC).

[Armazenamento e Estabilidade]
1. O kit de diagnóstico deve ser armazenado em uma bolsa selada a -20 ± 5 ℃.O prazo de validade é de 12 meses.

2. Consulte a data de fabricação e prazo de validade na embalagem externa.

3. O reagente mantém-se válido e estável dentro do prazo de validade se não for utilizado.O kit não deve ser congelado e descongelado mais de 5 vezes.

[Instrumento Aplicável]
O kit de diagnóstico é aplicável a MA-6000, série ABI, série Bio-Rad, Roche LightCycler R480, Cepheid
SmartCycler, série Rotor-Gene e outros instrumentos de PCR quantitativos multicanal em tempo real.

[Requisitos de amostra]
1. Tipos de amostra: amostras de soro ou exsudato de lesão

2.As amostras podem ser extraídas imediatamente ou congeladas entre -20°C e -80°C.

3. O transporte de amostras clínicas deve obedecer aos regulamentos locais para o transporte de agentes etiológicos.

[O julgamento do resultado da amostra]
1.Se a amostra de teste detectar uma curva de amplificação típica do tipo S no FAM≤38 e Cy5 tiver uma curva de amplificação típica, oCtis≤38.a amostra pode ser considerada MPV positiva.

2. Se a amostra de teste não tiver Ct ou Ct > 38 nos canais FAM e houver uma curva de amplificação tipo S típica no canal de controle interno (Cy5), o Ctis ≤38. a amostra pode ser considerada MPVnegativa.

3. Se a amostra de teste não tiver uma curva de amplificação típica do tipo S (sem valor Ct) ou valor Ct> 38 for detectado no FAM, e o canal Cy5 não tiver uma curva de amplificação típica (sem valor Ct) ou valor Ct> 38, significa que há um problema com a qualidade da amostra ou com a operação.Se o resultado for inválido, você deve encontrar e eliminar a causa, coletar a amostra novamente e repetir o teste (se o resultado do teste ainda for inválido, entre em contato com a empresa).

[Limitações do método de detecção]
1. Os resultados do teste do diagnóstico tickit podem ser usados apenas para referência clínica.O diagnóstico clínico e o tratamento de pacientes devem ser considerados em conjunto com seus sintomas, sinais, histórico médico e outras condições relacionadas.

2. Podem ocorrer resultados falsos negativos quando a concentração do ácido nucléico detectado na amostra de teste estiver abaixo do limite mínimo de detecção deste kit.

3. O manuseio inadequado da amostra testada durante a coleta, transporte, armazenamento e processamento pode facilmente resultar na degradação do DNA e resultados falsos negativos.

4. Quando as amostras são contaminadas durante a coleta, transporte, armazenamento e processamento, é fácil obter resultados falsos positivos.

[Índice de desempenho do produto]
1. LOD: O limite de detecção é de 200 cópias/ml.2. Precisão: Coeficiente de variação (CV%) do valor Ct de precisão dentro do lote ≤ 3%.3. Especificidade: Não há reação cruzada entre o kit e as amostras positivas, como Vírus Varíola, Vírus Vacina, Vírus Vaccinia, etc.

[Precauções]
1. Todo o processo de detecção deve ser realizado estritamente de acordo com os requisitos deste manual na área de preparação de reagentes, área de processamento de amostras e área de amplificação de PCR, e as roupas, instrumentos e consumíveis experimentais em cada área devem ser usados de forma independente e não podem ser misturado.

2. Controles negativos e positivos devem ser definidos para cada experimento.

3.Todos os reagentes do kit devem ser totalmente descongelados e misturados à temperatura ambiente e centrifugados imediatamente antes do uso.

4.Todos os controles negativos e positivos do kit devem ser transferidos para a área de preparação de amostras e armazenados separadamente antes do primeiro uso.

5. Para evitar interferência de fluorescência, evite tocar o tubo de reação de PCR diretamente com as mãos desprotegidas e evite qualquer marcação no tubo de reação de PCR.

6. Os parâmetros relacionados à amplificação do instrumento devem ser definidos de acordo com os requisitos relevantes deste manual, e diferentes lotes de reagentes não podem ser misturados.

7.Os resíduos do produto durante o experimento devem ser desintoxicados antes de serem descartados.

[Índice de símbolo]