MAGNUS INTERNATIONAL LIMITED
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[Nome do Produto]
Novo kit de detecção de ácido nucleico coronavírus (COVID-19)
(Método RT-PCR em tempo real)
[Especificação do pacote]
50 testes/kit
200 testes/kit
[Uso pretendido]
Este kit é usado para a detecção de ácido nucleico COVID-19 (ORF1ab/N Gene) e
diagnóstico assistido e vigilância epidemiológica da COVID-19.
[Princípio de teste]
As soluções de diagnóstico Sansure COVID-19 são usadas para detectar diretamente a presença de RNA viral, que será detectável em pacientes antes que os anticorpos se formem ou os sintomas da doença estejam presentes, o que significa que os resultados do teste podem dizer se alguém contrai o vírus muito cedo em sua doença.
O kit adota o princípio da tecnologia PCR quantitativa fluorescente em tempo real,
projeta primers e sondas específicos para COVID-19 (gene ORF1ab/N),
e os combina com instrumentos PCR quantitativos fluorescentes em tempo real para
detectar o ácido nucleico do vírus COVID-19.Para realizar a detecção qualitativa
do ácido nucleico do vírus COVID-19.
Além disso, o sistema de detecção de PCR usa controle interno positivo,
que monitora a presença de inibidores de PCR em amostras de teste, detectando
se o sinal de controle interno é normal, para evitar um resultado falso negativo.
[Componentes do Kit de Diagnóstico]
| Não. | Nome do reagente | Especificação& Qtd. | |
| 50T | 200T | ||
| 1 | Mistura PCR COVID-19 | 750µl x 1 tubo | 750µl x 4 tubos |
| 2 | Mistura Enzimática COVID-19 | 250µl x 1 tubo | 250µl x 4 tubos |
| 3 | Controle Negativo COVID-19 | 100µl x 1 tubo | 100µl x 4 tubos |
| 4 | Controle Positivo COVID-19 | 100µl x1tubo | 100µl x4tubo |
| 5 | Instruções | 1 porção | 1 porção |
Observação:
1. Não misture ou troque componentes de diferentes lotes de kits.
2. O Controle Negativo COVID-19 é água estéril sem nuclease e o Controle Negativo COVID-19
O Controle Positivo é o RNA transcrito in vitro que contém os genes alvo ORF1ab,
gene N e gene de controle interno.
[Armazenamento e Estabilidade]
1. O kit de diagnóstico deve ser armazenado em uma bolsa selada a -20±5℃. A data de validade
é de 12 meses.
2. Consulte a data de fabricação e prazo de validade na embalagem externa.
3. O reagente mantém-se válido e estável dentro do prazo de validade se não for utilizado.O kit deve
não ser congelado mais de 5 vezes.
[Instrumento Aplicável]
O kit de diagnóstico é aplicável a MA-6000, série ABI, série Bio-Rad, Roche
LightCycler R480, Cepheid SmartCycler, série Rotor-Gene e outros multicanal
instrumentos de PCR quantitativos em tempo real.
[Requisitos de amostra]
1. Tipos de amostra: Amostras do trato respiratório superior (incluindo zaragatoas,
swabs nasais, extratos nasofaríngeos, escarro para tosse profunda), trato respiratório inferior
espécimes (incluindo extratos do trato respiratório, líquido de lavagem brônquica, lavagem alveolar
líquido, espécimes de biópsia de tecido pulmonar), cultura de tecidos e outras amostras.
2. Condições de armazenamento: Os espécimes coletados devem ser enviados para inspeção
em tempo hábil, e as amostras devem ser armazenadas a 4℃ dentro de 24 horas.
É melhor armazenar a -70 ℃ por mais de 24 horas e evitar congelamento e descongelamento repetidos
ciclos.
[Método de teste]
1. Preparação de reagentes (realizada na “região de preparação de reagentes”)
1.1 Retire cada componente do kit de diagnóstico e coloque-os à temperatura ambiente.
Permita que os reagentes se equilibrem à temperatura ambiente e, em seguida, agite cada um deles no vórtice
respectivamente para uso posterior.
1.2 De acordo com o número de amostras de teste, COVID-19 Controle Positivo e
Controle negativo COVID-19, pipetar a quantidade apropriada de COVID-19 PCR Mix
e COVID-19 Enzyme Mix (COVID-19 PCR Mix 15 µl/test+COVID-19 Enzyme
Misture 5 µl/teste) misture bem para fazer uma mistura PCR-Master, centrifugue-a
instantaneamente para uso posterior.
| Nome do reagente | 1 Amostra | 10 Amostras | 25 amostras | 50 amostras | 100 amostras | 200 amostras |
| Mistura COVID-19PCR (µl) | 15 | 150 | 375 | 750 | 1500 | 3000 |
|
Enzima COVID-19 Mistura(µl) |
5 | 50 | 125 | 250 | 500 | 1000 |
|
PCR-Mastermix
|
20 | 200 | 500 | 1000 | 2000 | 4000 |
| Observação: A configuração acima é apenas sua referência e para garantir um volume suficiente do PCR-Mastermix, pode ser necessário mais volume da pipetagem real. | ||||||
1.3 Transfira os reagentes preparados acima para a "região de processamento de amostra" para
uso posterior.
2. Processamento e carregamento de amostras (realizado em "amostra
região de processamento")
2.1 Este kit de diagnóstico não inclui o kit de extração de RNA e DNA viral.Isso é
recomendado usar o kit de extração de RNA e DNA viral produzido por Changsha Renji
Medical Equipment Co, Ltd. para extrair o RNA viral.A operação específica está em
acordo com suas instruções.
2.2 Adicione 20 µl de PCR-Mastermix no tubo de reação de PCR com 5 µl acima da amostra processada,
Controle Positivo COVID-19 e Controle Negativo COVID-19 e tampe o tubo.Carregar
Detecção de PCR quantitativa de fluorescência no instrumento de PCR de fluorescência.
3. Amplificação por PCR (realizada na "área de amplificação de ácido nucleico")
3.1 Coloque os tubos de reação de PCR nos poços de amostra do equipamento de amplificação
Configure o Controle Positivo COVID-19 O Controle Negativo COVID-19 e as amostras a serem
testado na sequência correspondente e nome da amostra de entrada.
3.2 Defina os parâmetros do ciclo de acordo com a tabela a seguir para amplificação por PCR.
| Passos | Temperatura | Tempo | ciclos |
| 1 | 50°C | 10min | 1 |
| 2 | 95°C | 3min | 1 |
| 3 | 95°C | 10s | 40 |
| 55°C | 30s |
Observação:
1) A coleção de fluorescência é ajustada para "Step3:55°C, the 30s".Seleção de detecção
canais: FAM, HEX e Cy5, onde o canal FAM é o gene ORF1ab e HEX
o canal é o gene N.O canal Cy5 é o gene de controle interno e o sistema de reação
s definido para 25 µl.
2) Os instrumentos PCR fluorescentes da série ABI não selecionam a calibração ROX e selecionam
Nenhum para o grupo de têmpera.
[Valor de julgamento positivo e intervalo de referência]
1. Definição de condições para análise de resultados
O princípio de ajuste da linha de base e limite é geralmente baseado nos resultados
da análise automática do instrumento.Quando a inclinação geral da curva
aparecer, os valores inicial, final e limite da linha de base podem ser ajustados
de acordo com a imagem.Normalmente, o usuário pode ajustá-lo de acordo com o real
situação.O valor inicial pode ser definido como 3-15 e o valor final pode ser definido como 5-20.
Ajuste a curva de amplificação do controle negativo para torná-lo reto ou abaixo
a linha de espera de limiar.
2. Validade do Kit
2.1O Controle Positivo COVID-19:Os canais FAM, HEX e Cy 5 têm
Curvas de amplificação tipo S e Cts≤32.
2.2O controle negativo da COVID-19:Os canais FAM, HEX e Cy 5 não possuem
Ct ou Ct>38.
2.3Observação:As condições acima devem ser atendidas ao mesmo tempo, caso contrário, isso
experimento é inválido e precisa ser repetido.
3. O Valor do Julgamento Positivo
Através do estudo dos valores de referência, foi determinado que o valor de referência Ct
do gene alvo e o gene de controle interno detectado por este kit foram ambos 38.
[O julgamento do resultado da amostra]
1. Se a amostra de teste detectar curva de amplificação tipo S atípica no FAM, HEX
e Cy 5 canais e o Ct é ≤38, a amostra pode ser considerada como COVID-19
positivo.
2. Se a amostra de teste não tiver Ct ou Ct>38 nos canais FAM e HEX, e houver
é a curva de amplificação tipo S atípica no canal de controle interno (Cy 5), Cts≤38,
a amostra pode ser considerada negativa para COVID-19.
3. Se a amostra de teste tiver apenas valores de Ct 38 em um único canal do FAM ou HEX
canal, e há curva de amplificação tipo S atípica no Controle Interno
channel(Cy 5) , Ct≤38, os resultados precisam ser testados novamente.Se os resultados repetidos forem
consistente, a amostra pode ser julgada como positiva para COVID-19, os resultados repetidos
são negativos, exceto para a típica curva de amplificação do tipo S do controle interno
channel(Cy 5) , Ct≤38, que pode ser considerado negativo para COVID-19.
4. Se nenhuma curva de amplificação típica do tipo S (sem valor Ct) ou valor Ct>38 for detectado em
os canais FAM, HEX e Cy 5 da amostra de teste, isso significa que há um
problema com a qualidade da amostra ou um problema com a operação.Se o resultado
é inválido, você deve encontrar e eliminar a causa, coletar a amostra novamente,
e repita o teste (se o resultado do teste ainda for inválido, entre em contato com a empresa).
[Limitações do método de detecção]
1. Os resultados do teste do kit de diagnóstico podem ser usados apenas para referência clínica.o clínico
diagnóstico e tratamento de pacientes devem ser considerados em conjunto com seus
sintomas, sinais, histórico médico e outras condições relacionadas.
2. Resultados falsos negativos podem ocorrer quando a concentração do nucléico detectado
ácido na amostra de teste está abaixo do limite mínimo de detecção deste kit.
3. Manuseio inadequado da amostra testada durante a coleta, transporte,
armazenamento e processamento podem facilmente resultar em degradação do RNA e falso negativo
resultados.
4. Quando as amostras são contaminadas durante a coleta, transporte, armazenamento,
e processamento, é fácil obter resultados falsos positivos.
[Índice de desempenho do produto]
1.LOD: O limite de detecção é de 200 cópias/ml.
2. Precisão: Coeficiente de variação (CV%] do valor Ct de precisão dentro do lote≤3%.
3. Especificidade: Não há reação cruzada entre o kit e as amostras positivas, como
como Coronavírus Humano HCoV-NL63, Coronavírus Humano HCoV-OC43, SARS
Coronavírus, MERS Coronavírus, Vírus Influenza A, Vírus Influenza B Yamagata,
Victoria, vírus da gripe H1N1, vírus da gripe H3N2, vírus da gripe H5N1,
Vírus da Influenza H7N9, Vírus Sincicial Respiratório A, Adenovírus (tipo 2),
Adenovírus (tipo 2), Mycoplasma pneumoniae, Chlamydia pneumoniae,
Pertussis, Streptococcus Pneumoniae, Rhinovirus (Tipo A) etc.
[Precauções]
1. Todo o processo de detecção deve ser realizado estritamente de acordo com o
requisitos deste manual na área de preparação de reagentes, área de processamento de amostras,
e área de amplificação por PCR, e as roupas experimentais, instrumentos,
e consumíveis em cada área devem ser usados independentemente e não podem ser misturados.
2. Para evitar a degradação do RNA, o processo de processamento da amostra deve ser operado em
0-4 ℃, e o teste deve ser realizado imediatamente após o experimento ser
concluído.Os consumíveis de utensílios usados no processamento de amostras devem ser isentos de nuclease.
3. Controles negativos e positivos devem ser definidos para cada experimento.
4. Todos os reagentes do kit devem ser totalmente descongelados e misturados à temperatura ambiente e
centrifugado imediatamente antes do uso.
5. Todos os controles negativos e positivos do kit devem ser transferidos para a amostra
área de preparação e armazenados separadamente antes do primeiro uso.
6. Para evitar interferência de fluorescência, evite tocar no tubo de reação de PCR
diretamente com as mãos desprotegidas e evite qualquer marcação no tubo de reação de PCR.
7. Os parâmetros relacionados à amplificação do instrumento devem ser definidos de acordo com
os requisitos relevantes deste manual e diferentes lotes de reagentes não podem
ser misturado.
8. Os resíduos do produto durante o experimento devem ser desintoxicados antes de serem
descartado.
[ÍNDICE DE SÍMBOLO]
[EXPORTADOR]
Magnus International Limited
F12, New City International Mansion A, 234 Huapao Ave.
Liuyang, Província de Hunan 410300 China
Contato:Goodwellmedical@gmail.com
[FABRICANTE]
Changsha Renji Medical Equipment Co., Ltd.
No.18 Xiangtai Road, Liuyang Jingkai District,
Cidade de Changsha, Província de Hunan 410300 China
[VISTA DE FÁBRICA]
[OFICINA DE FÁBRICA]
[PRODUTO E NORMAS]
[CERTIFICAÇÕES]
[PERGUNTAS FREQUENTES]