Shanghai Korain Biotech Co., Ltd
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especificidade e sensibilidade do jogo de Ghrelin GHRL ELISA do rato 96wells
Cat.No E0896Ra
Escala padrão da curva: 40ng/L - 12000ng/L
Sensibilidade: 20.56ng/L
Tamanho: 96 poços
Armazenamento: Armazene os reagentes em 2-8°C. para um armazenamento de mais de 6 meses referem a data de validade mantêm-no em ciclos repetidos Avoid da aproximação amigável de -20°C. Se os reagentes individuais são abertos recomenda-se que o jogo esteja usado dentro de 1 mês.
* este produto é para o uso da pesquisa somente, não para o uso em procedimentos do diagnóstico. É recomenda altamente ler inteiramente antes de usar esta instrução.
Precisão
A precisão do Intra-ensaio (precisão dentro de um ensaio) três amostras de concentração conhecida foi testada em uma placa para avaliar a precisão do intra-ensaio.
A precisão do Inter-ensaio (precisão entre ensaios) três amostras de concentração conhecida foi testada em ensaios separados para avaliar a precisão do inter-ensaio.
CV (%) = SD/mean x 100
Intra-ensaio: CV<8>
Inter-ensaio: CV<10>
Uso pretendido
Este jogo do sanduíche é para a detecção quantitativa exata de rato Ghrelin (igualmente conhecido como GHRL) no soro, plasma, supernates da cultura celular, lysates da pilha, homogenates do tecido.
Princípio do ensaio
Este jogo é um ensaio Enzima-ligado da imunoabsorção (ELISA). A placa foi pré-revestida com o anticorpo do rato GHRL. GHRL apresentam na amostra são adicionados e ligam aos anticorpos revestidos nos poços. E o anticorpo então biotinylated do rato GHRL é adicionado e liga a GHRL na amostra. Então Streptavidin-HRP é adicionado e liga ao anticorpo de Biotinylated GHRL. Após a incubação Streptavidin-HRP desatado é lavado afastado durante uma etapa de lavagem. A solução da carcaça é adicionada então e a cor torna-se em proporção à quantidade do rato GHRL. A reação é terminada pela adição de ácido para a solução e a absorvência é medida em 450 nanômetro.
Coleção de espécime
O soro permite que o soro coagule por 10-20 minutos na temperatura ambiente. Centrifugador em 2000-3000 RPM por 20 minutos.
O plasma recolhe o plasma usando o EDTA ou a heparina como um anticoagulante. Centrifugue amostras por 15 minutos em 2000-3000 RPM em 2 - 8°C dentro de 30 minutos da coleção.
A urina recolhe pelo tubo estéril. Centrifugador em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Ao recolher o líquido fluido e cerebrospinal pleuroperitoneal, siga por favor os procedimentos acima mencionados.
O Supernatant da cultura celular recolhe pelos tubos estéreis ao examinar segregue componentes. Centrifugue em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Recolha os supernatants com cuidado. Ao examinar os componentes dentro da pilha, use PBS (pH 7.2-7.4) para diluir a suspensão da pilha à concentração da pilha de aproximadamente 1 million/ml. Danifique pilhas através dos ciclos repetidos da gelo-aproximação amigável para deixar para fora os componentes internos. Centrifugue em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
Tecidos da lavagem do tecido em PBS (pH 7,4) para remover completamente o sangue adicional e a pesá-lo antes da homogeneização. Triture tecidos e homogeneize-os em PBS (pH7.4) com um homogenizador de vidro no gelo. Aproximação amigável em 2-8°C ou gelo no centrifugador de -20°C. em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
Preparação do reagente
Todos os reagentes devem ser trazidos à temperatura ambiente antes de usar.
O padrão reconstitui o 120μl do padrão (12800ng/L) com o 120μl do diluente padrão para gerar uma solução 6400ng/L conservada em estoque padrão. Permita que o padrão sente-se por 15 minutos com agitação delicada antes de fazer diluições. Prepare pontos padrão duplicados em série diluindo a solução conservada em estoque padrão (6400ng/L) 1:2 com o diluente padrão para produzir as soluções 3200ng/L, 1600ng/L, 800ng/L e 400ng/L. O diluente padrão serve como o padrão zero (0 ng/L). Toda a solução restante deve ser congelada em -20°C e ser usada dentro de um mês. A diluição das soluções padrão sugeridas é como segue:
| 6400ng/L | Padrão No.5 | diluente original do padrão 120μl + do padrão 120μl |
| 3200ng/L | Padrão No.4 | padrão 120μl diluente do padrão No.5 + 120μl |
| 1600ng/L | Padrão No.3 | padrão 120μl diluente do padrão No.4 + 120μl |
| 800ng/L | Padrão No.2 | padrão 120μl diluente do padrão No.3 + 120μl |
| 400ng/L | Padrão No.1 | padrão 120μl diluente do padrão No.2 + 120μl |
| Concentração padrão | Padrão No.5 | Padrão No.4 | Padrão No.3 | Padrão No.2 | Padrão No.1 |
| 12800ng/L | 6400ng/L | 3200ng/L | 1600ng/L | 800ng/L | 400ng/L |
Amortecedor 20ml diluído da lavagem do concentrado 30x do amortecedor da lavagem no deionized ou água destilada para render 500 ml do amortecedor da lavagem 1x. Se os cristais formaram no concentrado, mistura delicadamente até que os cristais se dissolverem completamente.
Sumário
Lave a placa 5 vezes.
Adicione a solução A e B. Incubação da carcaça por 10 minutos em 37°C.
Adicione param a solução e a cor torna-se.
Leia o valor do OD dentro de 10 minutos.
Referências
Wei W., Wang G., Qi X., Englander E.W., Greeley G.H. Júnior
Endocrinologia 146:1611- 1625(2005)