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Rato da especificidade e da sensibilidade Pedágio-como o jogo do receptor 4 ELISA personalizado
Cat.No E1663Mo
Escala padrão da curva: 0.05ng/ml - 20ng/ml
Sensibilidade: 0.023ng/ml
Tamanho: 96 poços
Armazenamento: Armazene os reagentes em 2-8°C. para um armazenamento de mais de 6 meses referem a data de validade mantêm-no em ciclos repetidos Avoid da aproximação amigável de -20°C. Se os reagentes individuais são abertos recomenda-se que o jogo esteja usado dentro de 1 mês.
o produto dos *This é para o uso da pesquisa somente, não para o uso em procedimentos do diagnóstico. É recomenda altamente ler inteiramente antes de usar esta instrução.
Precisão
A precisão do Intra-ensaio (precisão dentro de um ensaio) três amostras de concentração conhecida foi testada em uma placa para avaliar a precisão do intra-ensaio.
A precisão do Inter-ensaio (precisão entre ensaios) três amostras de concentração conhecida foi testada em ensaios separados para avaliar a precisão do inter-ensaio.
CV (%) = SD/mean x 100
Intra-ensaio: CV<8>
Inter-ensaio: CV<10>
Coleção de espécime
O soro permite que o soro coagule por 10-20 minutos na temperatura ambiente. Centrifugador em 2000-3000 RPM por 20 minutos.
O plasma recolhe o plasma usando o EDTA ou a heparina como um anticoagulante. Centrifugue amostras por 15 minutos em 2000-3000 RPM em 2 - 8°C dentro de 30 minutos da coleção.
A urina recolhe pelo tubo estéril. Centrifugador em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Ao recolher o líquido fluido e cerebrospinal pleuroperitoneal, siga por favor os procedimentos acima mencionados.
O Supernatant da cultura celular recolhe pelos tubos estéreis ao examinar segregue componentes. Centrifugue em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Recolha os supernatants com cuidado. Ao examinar os componentes dentro da pilha, use PBS (pH 7.2-7.4) para diluir a suspensão da pilha à concentração da pilha de aproximadamente 1 million/ml. Danifique pilhas através dos ciclos repetidos da gelo-aproximação amigável para deixar para fora os componentes internos. Centrifugue em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
Tecidos da lavagem do tecido em PBS (pH 7,4) para remover completamente o sangue adicional e a pesá-lo antes da homogeneização. Triture tecidos e homogeneize-os em PBS (pH7.4) com um homogenizador de vidro no gelo. Aproximação amigável em 2-8°C ou gelo no centrifugador de -20°C. em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
Nota
o *Sample não pode ser diluído com este jogo. Devido o ao material nós usamo-nos para preparar o jogo, a interferência de matriz da amostra pode falsamente comprimir a especificidade e a precisão do ensaio.
Preparação do reagente
Todos os reagentes devem ser trazidos à temperatura ambiente antes de usar.
O padrão reconstitui o 120μl do padrão (24ng/ml) com o 120μl do diluente padrão para gerar uma solução 12ng/ml conservada em estoque padrão. Permita que o padrão sente-se por 15 minutos com agitação delicada antes de fazer diluições. Prepare pontos padrão duplicados em série diluindo o 1:2 padrão da solução conservada em estoque (12ng/ml) com o diluente padrão para produzir as soluções 6ng/ml, 3ng/ml, 1.5ng/ml e 0.75ng/ml. O diluente padrão serve como o padrão zero (0 ng/ml). Toda a solução restante deve ser congelada em -20℃ e ser usada dentro de um mês. A diluição das soluções padrão sugeridas é como segue:
12ng/ml | Padrão No.5 | diluente original do padrão 120μl + do padrão 120μl |
6ng/ml | Padrão No.4 | padrão 120μl diluente do padrão No.5 + 120μl |
3ng/ml | Padrão No.3 | padrão 120μl diluente do padrão No.4 + 120μl |
1.5ng/ml | Padrão No.2 | padrão 120μl diluente do padrão No.3 + 120μl |
0.75ng/ml | Padrão No.1 | padrão 120μl diluente do padrão No.2 + 120μl |
Concentração padrão | Padrão No.5 | Padrão No.4 | Padrão No.3 | Padrão No.2 | Padrão No.1 |
24ng/ml | 12ng/ml | 6ng/ml | 3ng/ml | 1.5ng/ml | 0.75ng/ml |
Amortecedor 20ml diluído da lavagem do concentrado 30x do amortecedor da lavagem no deionized ou água destilada para render 500 ml do amortecedor da lavagem 1x. Se os cristais formaram no concentrado, mistura delicadamente até que os cristais se dissolverem completamente.
Sumário
1. Prepare todos os reagentes, amostras e padrões.
2. Adicione a amostra e o reagente de ELISA em cada um bem. Incube para 1 hora em 37°C.
3. Lave a placa 5 vezes.
4. Adicione a solução A e B. Incubação da carcaça por 10 minutos em 37°C.
5. Adicione param a solução e a cor torna-se.
6. Leia o valor do OD dentro de 10 minutos.
Cálculo de resultado
Construa uma curva padrão traçando o OD médio para cada padrão no vertical (Y) linha central contra a concentração no horizontal (X) a linha central e tira uma melhor curva do ajuste através dos pontos no gráfico. Estes cálculos podem melhor ser executados com o software por computador do curva-encaixe e a melhor linha do ajuste pode ser determinada pela análise de regressão.