Descasque o jogo do rato ELISA da placa para uma análise da presença de Disintegrin/Metalloprotease 30

96 jogo alto do crescimento Fatora-23 ELISA do fibroblasto da especificidade do rato de Wells para a pesquisa

Cat.No E0170Ra

Escala padrão da curva: 5pg/ml - 1500pg/ml

Sensibilidade: 2.56pg/ml

Tamanho: 96 poços

Armazenamento: Armazene os reagentes em 2-8°C. para um armazenamento de mais de 6 meses referem a data de validade mantêm-no em ciclos repetidos Avoid da aproximação amigável de -20°C. Se os reagentes individuais são abertos recomenda-se que o jogo esteja usado dentro de 1 mês.

o produto dos *This é para o uso da pesquisa somente, não para o uso em procedimentos do diagnóstico. É recomenda altamente ler inteiramente antes de usar esta instrução.

Precisão

A precisão do Intra-ensaio (precisão dentro de um ensaio) três amostras de concentração conhecida foi testada em uma placa para avaliar a precisão do intra-ensaio.

A precisão do Inter-ensaio (precisão entre ensaios) três amostras de concentração conhecida foi testada em ensaios separados para avaliar a precisão do inter-ensaio.

CV (%) = SD/mean x 100

Intra-ensaio: CV<8>

Inter-ensaio: CV<10>

Uso pretendido

Este jogo do sanduíche é para a detecção quantitativa exata do crescimento Fatora-23 do fibroblasto do rato (igualmente conhecido como FGF-23) no soro, plasma, supernates da cultura celular, lysates da pilha, homogenates do tecido.

Precauções

• Antes do uso, o jogo e a amostra devem ser aquecidos naturalmente à temperatura ambiente 30 minutos.
• Esta instrução deve restritamente ser seguida na experiência.
• Uma vez que o número desejado de tiras foi removido, reseal imediatamente o saco para proteger permanecer da deterioração. Cubra todos os reagentes quando não no uso.
• Make sure que introduz com pipeta a ordem e a taxa de adição de bem-a-bem ao introduzir com pipeta reagentes.
• A pipeta derruba e o aferidor da placa à disposição deve ser limpo e descartável para evitar a contaminação colateral.
• Evite usar os reagentes dos grupos diferentes junto.
• A solução B da carcaça é sensível à luz, não expõe a solução B da carcaça para iluminar-se por muito tempo.
• Pare a solução contém o ácido. Vista por favor a proteção do olho, da mão e de pele ao usar este material. Evite o contato da pele ou das mucosas com reagente do jogo.
• O jogo não deve ser usado além da data de validade.

Coleção de espécime

O soro permite que o soro coagule por 10-20 minutos na temperatura ambiente. Centrifugador em 2000-3000 RPM por 20 minutos.

O plasma recolhe o plasma usando o EDTA ou a heparina como um anticoagulante. Centrifugue amostras por 15 minutos em 2000-3000 RPM em 2 - 8°C dentro de 30 minutos da coleção.

A urina recolhe pelo tubo estéril. Centrifugador em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Ao recolher o líquido fluido e cerebrospinal pleuroperitoneal, siga por favor os procedimentos acima mencionados.

O Supernatant da cultura celular recolhe pelos tubos estéreis ao examinar segregue componentes. Centrifugue em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Recolha os supernatants com cuidado. Ao examinar os componentes dentro da pilha, use PBS (pH 7.2-7.4) para diluir a suspensão da pilha à concentração da pilha de aproximadamente 1 million/ml. Danifique pilhas através dos ciclos repetidos da gelo-aproximação amigável para deixar para fora os componentes internos. Centrifugue em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.

Tecidos da lavagem do tecido em PBS (pH 7,4) para remover completamente o sangue adicional e a pesá-lo antes da homogeneização. Triture tecidos e homogeneize-os em PBS (pH7.4) com um homogenizador de vidro no gelo. Aproximação amigável em 2-8°C ou gelo no centrifugador de -20°C. em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.

Nota

• As concentrações da amostra devem ser previstas antes de ser usada no ensaio. Se a concentração da amostra não está dentro da escala da curva padrão, os usuários devem contactar-nos para determinar a amostra ótima para suas experiências particulares.
• As amostras a ser usadas no prazo de 5 dias devem ser armazenadas nas amostras 2-8°C. devem ser aliquoted ou devem ser armazenadas em -20°C dentro de 1 mês ou em -80°C dentro de 6 meses. Avoid repetiu ciclos da aproximação amigável do gelo.
• As amostras devem ser trazidas à temperatura ambiente antes de começar o ensaio.
• Centrifugador para recolher antes de usar a amostra.
• As amostras que contêm NaN3 não podem ser testadas enquanto inibe a atividade da peroxidase (HRP) do rabanete de cavalo.
• Recolha os supernatants com cuidado. Quando os sedimentos ocorreram durante o armazenamento, a centrifugação deve ser executada outra vez.
• A hemólise pode extremamente impactar a validez dos resultados da análise. Ciao para minimizar a hemólise.

o *Sample não pode ser diluído com este jogo. Devido o ao material nós usamo-nos para preparar o jogo, a interferência de matriz da amostra pode falsamente comprimir a especificidade e a precisão do ensaio.

Procedimento de ensaio

1. Prepare todos os reagentes, soluções padrão e amostras como instruídas. Traga todos os reagentes à temperatura ambiente antes de usar. O ensaio é executado na temperatura ambiente.

2. Determine o número de tiras exigidas para o ensaio. Introduza as tiras nos quadros para o uso. As tiras não utilizadas devem ser armazenadas em 2-8°C.

3. Adicione o padrão 50μl ao padrão bem. Nota: Não adicione o anticorpo ao padrão bem porque a solução padrão contém o anticorpo biotinylated.

4. Adicione a amostra 40μl aos poços da amostra e então adicione o anticorpo de 10μl anti-FGF-23 aos poços da amostra, a seguir adicione o streptavidin-HRP 50μl aos poços da amostra e aos poços padrão (poço do controle não vazio). Misture bem. Cubra a placa com um aferidor. Incube 60 minutos em 37°C.

5. Remova o aferidor e lave a placa 5 vezes com amortecedor da lavagem. Embeba poços com pelo menos o amortecedor da lavagem de 0,35 ml para 30 segundos a 1 minuto para cada Washington. Para a lavagem automatizada, aspire todos os poços e lave 5 vezes com o amortecedor da lavagem, enchendo em demasia jorra com amortecedor da lavagem. Borre a placa nas toalhas de papel ou no outro material absorvente.

6. Adicione a solução A da carcaça 50μl a cada um poço e adicione então a solução B da carcaça 50μl a cada um bem. Incube a placa coberta com um aferidor novo por 10 minutos em 37°C na obscuridade.

7. Adicione 50μl param a solução a cada um bem, a cor azul mudará no amarelo imediatamente.

8. Determine a densidade ótica (valor do OD) de cada um poço que usa imediatamente um grupo do leitor do microplate a 450 nanômetro dentro de 10 minuetos após ter adicionado a solução da parada.

Referances

“Expressão renal de FGF23 na doença renal progressiva do diabetes e no efeito do inibidor de ACE.”

Zanchi C., Locatelli M., Benigni A., Corna D., Tomasoni S., Rottoli D., Gaspari F., Remuzzi G., Zoja C.

Plos One 8: e70775-e 70775(2013)