Shanghai Korain Biotech Co., Ltd
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Jogo personalizado da elevada precisão FGF-23 ELISA do jogo do crescimento Fatora-23 ELISA do fibroblasto do rato
Cat.No E0170Ra
Escala padrão da curva: 5pg/ml - 1500pg/ml
Sensibilidade: 2.56pg/ml
Princípio do ensaio
Este jogo é um ensaio Enzima-ligado da imunoabsorção (ELISA). A placa foi pré-revestida com o anticorpo do rato FGF-23. FGF-23 apresentam na amostra são adicionados e ligam aos anticorpos revestidos nos poços. E o anticorpo então biotinylated do rato FGF-23 é adicionado e liga a FGF-23 na amostra. Então Streptavidin-HRP é adicionado e liga ao anticorpo de Biotinylated FGF-23. Após a incubação Streptavidin-HRP desatado é lavado afastado durante uma etapa de lavagem. A solução da carcaça é adicionada então e a cor torna-se em proporção à quantidade do rato FGF-23. A reação é terminada pela adição de ácido para a solução e a absorvência é medida em 450 nanômetro.
Reagente fornecido
| Componentes | Quantidade |
| Solução padrão (1600pg/ml) | 0.5ml x1 |
| Placa pré-revestida de ELISA | 12 * 8 tiras boas x1 |
| Diluente padrão | 3ml x1 |
| Streptavidin-HRP | 6ml x1 |
| Pare a solução | 6ml x1 |
| Solução A da carcaça | 6ml x1 |
| Solução B da carcaça | 6ml x1 |
| Concentrado do amortecedor da lavagem (30x) | 20ml x1 |
| Anticorpo do rato FGF-23 de Biotinylated | 1ml x1 |
| Instrução do usuário | 1 |
| Aferidor da placa | pics 2 |
| Saco do zíper | 1 PIC |
Preparação do reagente
Todos os reagentes devem ser trazidos à temperatura ambiente antes de usar.
O padrão reconstitui o 120μl do padrão (1600pg/ml) com o 120μl do diluente padrão para gerar uma solução 800pg/ml conservada em estoque padrão. Permita que o padrão sente-se por 15 minutos com agitação delicada antes de fazer diluições. Prepare pontos padrão duplicados em série diluindo o 1:2 padrão da solução conservada em estoque (800pg/ml) com o diluente padrão para produzir as soluções 400pg/ml, 200pg/ml, 100pg/ml e 50pg/ml. O diluente padrão serve como o padrão zero (0 pg/ml). Toda a solução restante deve ser congelada em -20°C e ser usada dentro de um mês. A diluição das soluções padrão sugeridas é como segue:
| 800pg/ml | Padrão No.5 | diluente original do padrão 120μl + do padrão 120μl |
| 400pg/ml | Padrão No.4 | padrão 120μl diluente do padrão No.5 + 120μl |
| 200pg/ml | Padrão No.3 | padrão 120μl diluente do padrão No.4 + 120μl |
| 100pg/ml | Padrão No.2 | padrão 120μl diluente do padrão No.3 + 120μl |
| 50pg/ml | Padrão No.1 | padrão 120μl diluente do padrão No.2 + 120μl |
| Concentração padrão | Padrão No.5 | Padrão No.4 | Padrão No.3 | Padrão No.2 | Padrão No.1 |
| 1600pg/ml | 800pg/ml | 400pg/ml | 200pg/ml | 100pg/ml | 50pg/ml |
Amortecedor 20ml diluído da lavagem do concentrado 30x do amortecedor da lavagem no deionized ou água destilada para render 500 ml do amortecedor da lavagem 1x. Se os cristais formaram no concentrado, mistura delicadamente até que os cristais se dissolverem completamente.
Procedimento de ensaio
1. Prepare todos os reagentes, soluções padrão e amostras como instruídas. Traga todos os reagentes à temperatura ambiente antes de usar. O ensaio é executado na temperatura ambiente.
2. Determine o número de tiras exigidas para o ensaio. Introduza as tiras nos quadros para o uso. As tiras não utilizadas devem ser armazenadas em 2-8°C.
3. Adicione o padrão 50μl ao padrão bem. Nota: Não adicione o anticorpo ao padrão bem porque a solução padrão contém o anticorpo biotinylated.
4. Adicione a amostra 40μl aos poços da amostra e então adicione o anticorpo de 10μl anti-FGF-23 aos poços da amostra, a seguir adicione o streptavidin-HRP 50μl aos poços da amostra e aos poços padrão (poço do controle não vazio). Misture bem. Cubra a placa com um aferidor. Incube 60 minutos em 37°C.
5. Remova o aferidor e lave a placa 5 vezes com amortecedor da lavagem. Embeba poços com pelo menos o amortecedor da lavagem de 0,35 ml para 30 segundos a 1 minuto para cada Washington. Para a lavagem automatizada, aspire todos os poços e lave 5 vezes com o amortecedor da lavagem, enchendo em demasia jorra com amortecedor da lavagem. Borre a placa nas toalhas de papel ou no outro material absorvente.
6. Adicione a solução A da carcaça 50μl a cada um poço e adicione então a solução B da carcaça 50μl a cada um bem. Incube a placa coberta com um aferidor novo por 10 minutos em 37°C na obscuridade.
7. Adicione 50μl param a solução a cada um bem, a cor azul mudará no amarelo imediatamente.
8. Determine a densidade ótica (valor do OD) de cada um poço que usa imediatamente um grupo do leitor do microplate a 450 nanômetro dentro de 10 minuetos após ter adicionado a solução da parada.
Cálculo de resultado
Construa uma curva padrão traçando o OD médio para cada padrão no vertical (Y) linha central contra a concentração no horizontal (X) a linha central e tira uma melhor curva do ajuste através dos pontos no gráfico. Estes cálculos podem melhor ser executados com o software por computador do curva-encaixe e a melhor linha do ajuste pode ser determinada pela análise de regressão.
Referances
“NENHUNS jogos um papel em diminuições LPS-induzidas em circular IGF-I e IGFBP-3 e sua expressão genética no fígado.”
Priego T., Ibanez de Caceres I., Martin A.I., Villanua M.A., López-Calderon A.
Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 286: E50- 6(2004)