Jogo do rato Netrin-1 ELISA da elevada precisão e da especificidade da placa de 96 Wells personalizado

Jogo do rato Netrin-1 ELISA da elevada precisão e da especificidade da placa de 96 Wells personalizado
 

Cat.No E1802Mo

Escala padrão da curva: 0.5ng/L - 200ng/L

Sensibilidade: 0.38ng/L

Tamanho: 96 poços

Precisão

A precisão do Intra-ensaio (precisão dentro de um ensaio) três amostras de concentração conhecida foi testada em uma placa para avaliar a precisão do intra-ensaio.

A precisão do Inter-ensaio (precisão entre ensaios) três amostras de concentração conhecida foi testada em ensaios separados para avaliar a precisão do inter-ensaio.

CV (%) = SD/mean x 100

Intra-ensaio: CV<8>

Inter-ensaio: CV<10>

Uso pretendido

Este jogo do sanduíche é para a detecção quantitativa exata do rato Netrin-1 (igualmente conhecido como Ntn1) no soro, plasma, supernates da cultura celular, lysates da pilha, homogenates do tecido.

Princípio do ensaio

Este jogo é um ensaio Enzima-ligado da imunoabsorção (ELISA). A placa foi pré-revestida com o anticorpo do rato Ntn1. Ntn1 apresentam na amostra são adicionados e ligam aos anticorpos revestidos nos poços. E o anticorpo então biotinylated do rato Ntn1 é adicionado e liga a Ntn1 na amostra. Então Streptavidin-HRP é adicionado e liga ao Biotinylated Ntn1antibody. Após a incubação Streptavidin-HRP desatado é lavado afastado durante uma etapa de lavagem. A solução da carcaça é adicionada então e a cor torna-se em proporção à quantidade do rato Ntn1. A reação é terminada pela adição de ácido para a solução e a absorvência é medida em 450 nanômetro.

Coleção de espécime

O soro permite que o soro coagule por 10-20 minutos na temperatura ambiente. Centrifugador em 2000-3000 RPM por 20 minutos.

O plasma recolhe o plasma usando o EDTA ou a heparina como um anticoagulante. Centrifugue amostras por 15 minutos em 2000-3000 RPM em 2 - 8°C dentro de 30 minutos da coleção.

A urina recolhe pelo tubo estéril. Centrifugador em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Ao recolher o líquido fluido e cerebrospinal pleuroperitoneal, siga por favor os procedimentos acima mencionados.

O Supernatant da cultura celular recolhe pelos tubos estéreis ao examinar segregue componentes. Centrifugue em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Recolha os supernatants com cuidado. Ao examinar os componentes dentro da pilha, use PBS (pH 7.2-7.4) para diluir a suspensão da pilha à concentração da pilha de aproximadamente 1 million/ml. Danifique pilhas através dos ciclos repetidos da gelo-aproximação amigável para deixar para fora os componentes internos. Centrifugue em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.

O tecido outros líquidos de corpo enxágua tecidos em PBS (pH 7,4) para remover completamente o sangue adicional e para pesá-lo antes da homogeneização. Triture tecidos e homogeneize-os em PBS (pH7.4) com um homogenizador de vidro no gelo. Aproximação amigável em 2-8°C ou gelo no centrifugador de -20°C. em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.

Nota

• As concentrações da amostra devem ser previstas antes de ser usada no ensaio. Se a concentração da amostra não está dentro da escala da curva padrão, os usuários devem contactar-nos para determinar a amostra ótima para suas experiências particulares.
• As amostras a ser usadas no prazo de 5 dias devem ser armazenadas nas amostras 2-8°C. devem ser aliquoted ou devem ser armazenadas em -20°C dentro de 1 mês ou em -80°C dentro de 6 meses. Avoid repetiu ciclos da aproximação amigável do gelo.
• As amostras devem ser trazidas à temperatura ambiente antes de começar o ensaio.
• Centrifugador para recolher antes de usar a amostra.
• As amostras que contêm NaN3 não podem ser testadas enquanto inibe a atividade da peroxidase (HRP) do rabanete de cavalo.
• Recolha os supernatants com cuidado. Quando os sedimentos ocorreram durante o armazenamento, a centrifugação deve ser executada outra vez.
• A hemólise pode extremamente impactar a validez dos resultados da análise. Ciao para minimizar a hemólise.

o *Sample não pode ser diluído com este jogo. Devido o ao material nós usamo-nos para preparar o jogo, a interferência de matriz da amostra pode falsamente comprimir a especificidade e a precisão do ensaio.

Preparação do reagente

Todos os reagentes devem ser trazidos à temperatura ambiente antes de usar.

O padrão reconstitui o 120μl do padrão (240ng/L) com o 120μl do diluente padrão para gerar uma solução 120ng/L conservada em estoque padrão. Permita que o padrão sente-se por 15 minutos com agitação delicada antes de fazer diluições. Prepare pontos padrão duplicados em série diluindo a solução conservada em estoque padrão (120ng/L) 1:2 com o diluente padrão para produzir as soluções 60ng/L, 30ng/L, 15ng/L e 7.5ng/L. O diluente padrão serve como o padrão zero (0 ng/L). Toda a solução restante deve ser congelada em -20°C e ser usada dentro de um mês. A diluição das soluções padrão sugeridas é como segue:

Amortecedor 20ml diluído da lavagem do concentrado 30x do amortecedor da lavagem no deionized ou água destilada para render 500 ml do amortecedor da lavagem 1x. Se os cristais formaram no concentrado, mistura delicadamente até que os cristais se dissolverem completamente.

Procedimento de ensaio

1. Prepare todos os reagentes, soluções padrão e amostras como instruídas. Traga todos os reagentes à temperatura ambiente antes de usar. O ensaio é executado na temperatura ambiente.

2. Determine o número de tiras exigidas para o ensaio. Introduza as tiras nos quadros para o uso. As tiras não utilizadas devem ser armazenadas em 2-8°C.

3. Adicione o padrão 50μl ao padrão bem. Nota: Não adicione o anticorpo ao padrão bem porque a solução padrão contém o anticorpo biotinylated.

4. Adicione a amostra 40μl aos poços da amostra e então adicione o anticorpo de 10μl anti-Ntn1 aos poços da amostra, a seguir adicione o streptavidin-HRP 50μl aos poços da amostra e aos poços padrão (poço do controle não vazio). Misture bem. Cubra a placa com um aferidor. Incube 60 minutos em 37°C.

5. Remova o aferidor e lave a placa 5 vezes com amortecedor da lavagem. Embeba poços com pelo menos o amortecedor da lavagem de 0,35 ml para 30 segundos a 1 minuto para cada Washington. Para a lavagem automatizada, aspire todos os poços e lave 5 vezes com o amortecedor da lavagem, enchendo em demasia jorra com amortecedor da lavagem. Borre a placa nas toalhas de papel ou no outro material absorvente.

6. Adicione a solução A da carcaça 50μl a cada um poço e adicione então a solução B da carcaça 50μl a cada um bem. Incube a placa coberta com um aferidor novo por 10 minutos em 37°C na obscuridade.

7. Adicione 50μl param a solução a cada um bem, a cor azul mudará no amarelo imediatamente.

8. Determine a densidade ótica (valor do OD) de cada um poço que usa imediatamente um grupo do leitor do microplate a 450 nanômetro dentro de 10 minuetos após ter adicionado a solução da parada.

Referances

“Netrin-1 atua como um fator da sobrevivência através de seus receptors UNC5H e DCC.”
Llambi F., Causeret F., Bloch-Gallego E., Mehlen P.
A EMBO J. 20:2715- 2722(2001)