Shanghai Korain Biotech Co., Ltd
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96 jogo bom do sanduíche ELISA de Resistin do rato do jogo de Retn ELISA do rato da placa personalizado
Cat.No E0263Mo
Escala padrão da curva: 0.3ng/ml - 90ng/ml
Sensibilidade: 0.13ng/ml
Tamanho: 96 poços
o produto dos *This é para o uso da pesquisa somente, não para o uso em procedimentos do diagnóstico. É recomenda altamente ler inteiramente antes de usar esta instrução.
Uso pretendido
Este jogo do sanduíche é para a detecção quantitativa exata do rato Nesfatin1 (igualmente conhecido como Retn) no soro, plasma, supernates da cultura celular, lysates da pilha, homogenates do tecido.
Princípio do ensaio
Este jogo é um ensaio Enzima-ligado da imunoabsorção (ELISA). A placa foi pré-revestida com o anticorpo de Retn do rato. Retn apresenta na amostra é adicionado e liga aos anticorpos revestidos nos poços. E o anticorpo então biotinylated de Retn do rato é adicionado e liga a Retn na amostra. Então Streptavidin-HRP é adicionado e liga ao anticorpo de Biotinylated Retn. Após a incubação Streptavidin-HRP desatado é lavado afastado durante uma etapa de lavagem. A solução da carcaça é adicionada então e a cor torna-se em proporção à quantidade de rato Retn. A reação é terminada pela adição de ácido para a solução e a absorvência é medida em 450 nanômetro.
Precauções
Coleção de espécime
O soro permite que o soro coagule por 10-20 minutos na temperatura ambiente. Centrifugador em 2000-3000 RPM por 20 minutos.
O plasma recolhe o plasma usando o EDTA ou a heparina como um anticoagulante. Centrifugue amostras por 15 minutos em 2000-3000 RPM em 2 - 8°C dentro de 30 minutos da coleção.
A urina recolhe pelo tubo estéril. Centrifugador em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Ao recolher o líquido fluido e cerebrospinal pleuroperitoneal, siga por favor os procedimentos acima mencionados.
O Supernatant da cultura celular recolhe pelos tubos estéreis ao examinar segregue componentes. Centrifugue em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Recolha os supernatants com cuidado. Ao examinar os componentes dentro da pilha, use PBS (pH 7.2-7.4) para diluir a suspensão da pilha à concentração da pilha de aproximadamente 1 million/ml. Danifique pilhas através dos ciclos repetidos da gelo-aproximação amigável para deixar para fora os componentes internos. Centrifugue em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
O tecido outros líquidos de corpo enxágua tecidos em PBS (pH 7,4) para remover completamente o sangue adicional e para pesá-lo antes da homogeneização. Triture tecidos e homogeneize-os em PBS (pH7.4) com um homogenizador de vidro no gelo. Aproximação amigável em 2-8°C ou gelo no centrifugador de -20°C. em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
Preparação do reagente
Todos os reagentes devem ser trazidos à temperatura ambiente antes de usar.
O padrão reconstitui o 120μl do padrão (96ng/ml) com o 120μl do diluente padrão para gerar uma solução 48ng/ml conservada em estoque padrão. Permita que o padrão sente-se por 15 minutos com agitação delicada antes de fazer diluições. Prepare pontos padrão duplicados em série diluindo o 1:2 padrão da solução conservada em estoque (48ng/ml) com o diluente padrão para produzir as soluções 24ng/ml, 12ng/ml, 6ng/ml e 3ng/ml. O diluente padrão serve como o padrão zero (0 ng/ml). Toda a solução restante deve ser congelada em -20℃ e ser usada dentro de um mês. A diluição das soluções padrão sugeridas é como segue:
| 48ng/ml | Padrão No.5 | diluente original do padrão 120μl + do padrão 120μl |
| 24ng/ml | Padrão No.4 | padrão 120μl diluente do padrão No.5 + 120μl |
| 12ng/ml | Padrão No.3 | padrão 120μl diluente do padrão No.4 + 120μl |
| 6ng/ml | Padrão No.2 | padrão 120μl diluente do padrão No.3 + 120μl |
| 3ng/ml | Padrão No.1 | padrão 120μl diluente do padrão No.2 + 120μl |
| Concentração padrão | Padrão No.5 | Padrão No.4 | Padrão No.3 | Padrão No.2 | Padrão No.1 |
| 96ng/ml | 48ng/ml | 24ng/ml | 12ng/ml | 6ng/ml | 3ng/ml |
Amortecedor 20ml diluído da lavagem do concentrado 30x do amortecedor da lavagem no deionized ou água destilada para render 500 ml do amortecedor da lavagem 1x. Se os cristais formaram no concentrado, mistura delicadamente até que os cristais se dissolverem completamente.
Procedimento de ensaio
1. Prepare todos os reagentes, soluções padrão e amostras como instruídas. Traga todos os reagentes à temperatura ambiente antes de usar. O ensaio é executado na temperatura ambiente.
2. Determine o número de tiras exigidas para o ensaio. Introduza as tiras nos quadros para o uso. As tiras não utilizadas devem ser armazenadas em 2-8°C.
3. Adicione o padrão 50μl ao padrão bem. Nota: Não adicione o anticorpo ao padrão bem porque a solução padrão contém o anticorpo biotinylated.
4. Adicione a amostra 40μl aos poços da amostra e então adicione o anti-Retn anticorpo 10μl aos poços da amostra, a seguir adicione o streptavidin-HRP 50μl aos poços da amostra e aos poços padrão (poço do controle não vazio). Misture bem. Cubra a placa com um aferidor. Incube 60 minutos em 37°C.
5. Remova o aferidor e lave a placa 5 vezes com amortecedor da lavagem. Embeba poços com pelo menos o amortecedor da lavagem de 0,35 ml para 30 segundos a 1 minuto para cada Washington. Para a lavagem automatizada, aspire todos os poços e lave 5 vezes com o amortecedor da lavagem, enchendo em demasia jorra com amortecedor da lavagem. Borre a placa nas toalhas de papel ou no outro material absorvente.
6. Adicione a solução A da carcaça 50μl a cada um poço e adicione então a solução B da carcaça 50μl a cada um bem. Incube a placa coberta com um aferidor novo por 10 minutos em 37°C na obscuridade.
7. Adicione 50μl param a solução a cada um bem, a cor azul mudará no amarelo imediatamente.
8. Determine a densidade ótica (valor do OD) de cada um poço que usa imediatamente um grupo do leitor do microplate a 450 nanômetro dentro de 10 minuetos após ter adicionado a solução da parada.
Referances
“Resistin e expressão genética da RELM-alfa no tecido adiposo branco de ratos da aleitação.”
Bing C., Gómez-Ambrosi J., Zabalegui N., Williams G., Trayhurn P.
Biochem. Biophys. Res. Commun. 296:458- 462(2002)