Especificidade forte ELISA da pesquisa 96 do laboratório dos jogos bovinos de Wells IGF 1

Jogo forte bovino do teste da sensibilidade e da especificidade IGF 1 ELISA de Wells da pesquisa 96 do laboratório
 

Cat.No E0016 BO

Procedimento de ensaio

1. Prepare todos os reagentes, soluções padrão e amostras como instruídas. Traga todos os reagentes à temperatura ambiente antes de usar. O ensaio é executado na temperatura ambiente.

2. Determine o número de tiras exigidas para o ensaio. Introduza as tiras nos quadros para o uso. As tiras não utilizadas devem ser armazenadas em 2-8°C.

3. Adicione o padrão 50μl ao padrão bem. Nota: Não adicione o anticorpo ao padrão bem porque a solução padrão contém o anticorpo biotinylated.

4. Adicione a amostra 40μl aos poços da amostra e então adicione o anticorpo de 10μl anti-IGF-1 aos poços da amostra, a seguir adicione o streptavidin-HRP 50μl aos poços da amostra e aos poços padrão (poço do controle não vazio). Misture bem. Cubra a placa com um aferidor. Incube 60 minutos em 37°C.

5. Remova o aferidor e lave a placa 5 vezes com amortecedor da lavagem. Embeba poços com pelo menos o amortecedor da lavagem de 0,35 ml para 30 segundos a 1 minuto para cada Washington. Para a lavagem automatizada, aspire todos os poços e lave 5 vezes com o amortecedor da lavagem, enchendo em demasia jorra com amortecedor da lavagem. Borre a placa nas toalhas de papel ou no outro material absorvente.

6. Adicione a solução A da carcaça 50μl a cada um poço e adicione então a solução B da carcaça 50μl a cada um bem. Incube a placa coberta com um aferidor novo por 10 minutos em 37°C na obscuridade.

7. Adicione 50μl param a solução a cada um bem, a cor azul mudará no amarelo imediatamente.

8. Determine a densidade ótica (valor do OD) de cada um poço que usa imediatamente um grupo do leitor do microplate a 450 nanômetro dentro de 10 minuetos após ter adicionado a solução da parada.

Escala padrão da curva: 1ng/ml - 400ng/ml

Sensibilidade: 0.53ng/ml

Tamanho: 96 poços

o produto dos *This é para o uso da pesquisa somente, não para o uso em procedimentos do diagnóstico. É recomenda altamente ler inteiramente antes de usar esta instrução.

Uso pretendido

Este jogo do sanduíche é para a detecção quantitativa exata de Bovídeos Insulina-como os fatores de crescimento 1 (igualmente conhecidos como IGF-1) no soro, plasma, supernates da cultura celular, lysates da pilha, homogenates do tecido.

Princípio do ensaio

Este jogo do teste de ELISA é um ensaio Enzima-ligado da imunoabsorção (ELISA). A placa foi pré-revestida com o anticorpo IGF-1 bovino. IGF-1 apresentam na amostra são adicionados e ligam aos anticorpos revestidos nos poços. E o anticorpo IGF-1 bovino então biotinylated é adicionado e liga a IGF-1 na amostra. Então Streptavidin-HRP é adicionado e liga ao anticorpo de Biotinylated IGF-1. Após a incubação Streptavidin-HRP desatado é lavado afastado durante uma etapa de lavagem. A solução da carcaça é adicionada então e a cor torna-se em proporção à quantidade de IGF-1 bovino. A reação é terminada pela adição de ácido para a solução e a absorvência é medida em 450 nanômetro.

Reagente fornecido

Precauções

• Antes do uso, o jogo e a amostra do teste de ELISA devem ser aquecidos naturalmente à temperatura ambiente 30 minutos.
• Esta instrução deve restritamente ser seguida na experiência.
• Uma vez que o número desejado de tiras foi removido, reseal imediatamente o saco para proteger permanecer da deterioração. Cubra todos os reagentes quando não no uso.
• Make sure que introduz com pipeta a ordem e a taxa de adição de bem-a-bem ao introduzir com pipeta reagentes.
• A pipeta derruba e o aferidor da placa à disposição deve ser limpo e descartável para evitar a contaminação colateral.
• Evite usar os reagentes dos grupos diferentes junto.
• A solução B da carcaça é sensível à luz, não expõe a solução B da carcaça para iluminar-se por muito tempo.
• Pare a solução contém o ácido. Vista por favor a proteção do olho, da mão e de pele ao usar este material. Evite o contato da pele ou das mucosas com reagente do jogo.
• O jogo do teste de ELISA não deve ser usado além da data de validade.

Preparação do reagente

Todos os reagentes devem ser trazidos à temperatura ambiente antes de usar.

O padrão reconstitui o 120μl do padrão (480ng/ml) com o 120μl do diluente padrão para gerar uma solução 240ng/ml conservada em estoque padrão. Permita que o padrão sente-se por 15 minutos com agitação delicada antes de fazer diluições. Prepare pontos padrão duplicados em série diluindo o 1:2 padrão da solução conservada em estoque (240ng/ml) com o diluente padrão para produzir as soluções 120ng/ml, 60ng/ml, 30ng/ml e 15ng/ml. O diluente padrão serve como o padrão zero (0 ng/ml). Toda a solução restante deve ser congelada em -20°C e ser usada dentro de um mês. A diluição das soluções padrão sugeridas é como segue:

Amortecedor 20ml diluído da lavagem do concentrado 30x do amortecedor da lavagem no deionized ou água destilada para render 600 ml do amortecedor da lavagem 1x. Se os cristais formaram no concentrado, mistura delicadamente até que os cristais se dissolverem completamente.

Referances

“Expressão insulina-como do fator de crescimento 1 (IGF-1) no oviducto bovino durante o ciclo oestrous.”
Schmidt A., Einspanier R., Amselgruber W., Sinowatz F., Schams D.
Exp. Clin. Endocrinol. 102:364- 369(1994)