Tamanho suíno de Wells do jogo 96 do Immunoassay ELISA do sanduíche de CORT com sensibilidade forte

Tamanho suíno de Wells do jogo 96 do teste de Immunoassay do sanduíche de CORT com sensibilidade e especificidade fortes
 

Uso pretendido

Este jogo do teste de Immunoassay do sanduíche é para a detecção quantitativa exata de Corticosterone suíno (igualmente conhecido como CORT) no soro, plasma, supernates da cultura celular, lysates da pilha, homogenates do tecido.

Princípio do ensaio

Este jogo do teste de Immunoassay do sanduíche é um ensaio Enzima-ligado da imunoabsorção (ELISA). A placa foi pré-revestida com o anticorpo suíno de CORT. CORT apresentam na amostra são adicionados e ligam aos anticorpos revestidos nos poços. E o anticorpo suíno então biotinylated de CORT é adicionado e liga a CORT na amostra. Então Streptavidin-HRP é adicionado e liga ao anticorpo de Biotinylated CORT. Após a incubação Streptavidin-HRP desatado é lavado afastado durante uma etapa de lavagem. A solução da carcaça é adicionada então e a cor torna-se em proporção à quantidade de CORT suíno. A reação é terminada pela adição de ácido para a solução e a absorvência é medida em 450 nanômetro.

Reagente fornecido

Material exigido mas não fornecido

• Incubadora 37°C±0.5°C
• Papel absorvente
• Pipeta da precisão e pontas descartáveis da pipeta
• Limpe os tubos
• Deionized ou água destilada
• Leitor de Microplate com 450 o filtro do comprimento de onda do ± 10nm

Coleção de espécime

O soro permite que o soro coagule por 10-20 minutos na temperatura ambiente. Centrifugador em 2000-3000 RPM por 20 minutos.

O plasma recolhe o plasma usando o EDTA ou a heparina como um anticoagulante. Centrifugue amostras por 15 minutos em 2000-3000 RPM em 2 - 8°C dentro de 30 minutos da coleção.

A urina recolhe pelo tubo estéril. Centrifugador em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Ao recolher o líquido fluido e cerebrospinal pleuroperitoneal, siga por favor os procedimentos acima mencionados.

O Supernatant da cultura celular recolhe pelos tubos estéreis ao examinar segregue componentes. Centrifugue em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Recolha os supernatants com cuidado. Ao examinar os componentes dentro da pilha, use PBS (pH 7.2-7.4) para diluir a suspensão da pilha à concentração da pilha de aproximadamente 1 million/ml. Danifique pilhas através dos ciclos repetidos da gelo-aproximação amigável para deixar para fora os componentes internos. Centrifugue em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.

Tecidos da lavagem do tecido em PBS (pH 7,4) para remover completamente o sangue adicional e a pesá-lo antes da homogeneização. Triture tecidos e homogeneize-os em PBS (pH7.4) com um homogenizador de vidro no gelo. Aproximação amigável em 2-8°C ou gelo no centrifugador de -20°C. em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.

Nota

• As concentrações da amostra devem ser previstas antes de ser usada no ensaio. Se a concentração da amostra não está dentro da escala da curva padrão, os usuários devem contactar-nos para determinar a amostra ótima para suas experiências particulares.
• As amostras a ser usadas no prazo de 5 dias devem ser armazenadas nas amostras 2-8°C. devem ser aliquoted ou devem ser armazenadas em -20°C dentro de 1 mês ou em -80°C dentro de 6 meses. Avoid repetiu ciclos da aproximação amigável do gelo.
• As amostras devem ser trazidas à temperatura ambiente antes de começar o ensaio.
• Centrifugador para recolher antes de usar a amostra.
• As amostras que contêm NaN3 não podem ser testadas enquanto inibe a atividade da peroxidase (HRP) do rabanete de cavalo.
• Recolha os supernatants com cuidado. Quando os sedimentos ocorreram durante o armazenamento, a centrifugação deve ser executada outra vez.
• A hemólise pode extremamente impactar a validez dos resultados da análise. Ciao para minimizar a hemólise.

o *Sample não pode ser diluído com este jogo. Devido o ao material nós usamo-nos para preparar o jogo, a interferência de matriz da amostra pode falsamente comprimir a especificidade e a precisão do ensaio.

Sumário

1. Prepare todos os reagentes, amostras e padrões.

2. Adicione a amostra e o reagente de ELISA em cada um bem. Incube para 1 hora em 37°C.

3. Lave a placa 5 vezes.

4. Adicione a solução A e B. Incubação da carcaça por 10 minutos em 37°C.

5. Adicione param a solução e a cor torna-se.

6. Leia o valor do OD dentro de 10 minutos.

Cálculo de resultado

Construa uma curva padrão traçando o OD médio para cada padrão no vertical (Y) linha central contra a concentração no horizontal (X) a linha central e tira uma melhor curva do ajuste através dos pontos no gráfico. Estes cálculos podem melhor ser executados com o software por computador do curva-encaixe e a melhor linha do ajuste pode ser determinada pela análise de regressão.