Shanghai Korain Biotech Co., Ltd
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TPI1 humano personalizado Enzima-ligou o jogo do ensaio da imunoabsorção altamente sensível com o serviço do Oem
Cat.No E6795Hu
Preparação do reagente
Todos os reagentes devem ser trazidos à temperatura ambiente antes de usar.
O padrão reconstitui o 120μl do padrão (4000ng/L) com o 120μl do diluente padrão para gerar uma solução 2000ng/L conservada em estoque padrão. Permita que o padrão sente-se por 15 minutos com agitação delicada antes de fazer diluições. Prepare pontos padrão duplicados em série diluindo a solução conservada em estoque padrão (2000ng/L) 1:2 com o diluente padrão para produzir as soluções 1000ng/L, 500ng/L, 250ng/L e 125ng/L. O diluente padrão serve como o padrão zero (0 ng/L). Toda a solução restante deve ser congelada em -20°C e ser usada dentro de um mês. A diluição das soluções padrão sugeridas é como segue:
| 2000ng/L | Padrão No.5 | diluente original do padrão 120μl + do padrão 120μl |
| 1000ng/L | Padrão No.4 | padrão 120μl diluente do padrão No.5 + 120μl |
| 500ng/L | Padrão No.3 | padrão 120μl diluente do padrão No.4 + 120μl |
| 250ng/L | Padrão No.2 | padrão 120μl diluente do padrão No.3 + 120μl |
| 125ng/L | Padrão No.1 | padrão 120μl diluente do padrão No.2 + 120μl |
| Concentração padrão | Padrão No.5 | Padrão No.4 | Padrão No.3 | Padrão No.2 | Padrão No.1 |
| 4000ng/L | 2000ng/L | 1000ng/L | 500ng/L | 250ng/L | 125ng/L |
Amortecedor 20ml diluído da lavagem do concentrado 25x do amortecedor da lavagem no deionized ou água destilada para render 500 ml do amortecedor da lavagem 1x. Se os cristais formaram no concentrado, mistura delicadamente até que os cristais se dissolverem completamente.
Tamanho: 96 poços
Armazenamento: Armazene os reagentes em 2-8°C. para um armazenamento de mais de 6 meses referem a data de validade mantêm-no em ciclos repetidos Avoid da aproximação amigável de -20°C. Se os reagentes individuais são abertos recomenda-se que o jogo esteja usado dentro de 1 mês.
o produto dos *This é para o uso da pesquisa somente, não para o uso em procedimentos do diagnóstico. É recomenda altamente ler inteiramente antes de usar esta instrução.
Precisão
A precisão do Intra-ensaio (precisão dentro de um ensaio) três amostras de concentração conhecida foi testada em uma placa para avaliar a precisão do intra-ensaio.
A precisão do Inter-ensaio (precisão entre ensaios) três amostras de concentração conhecida foi testada em ensaios separados para avaliar a precisão do inter-ensaio.
CV (%) = SD/mean x 100
Intra-ensaio: CV<8>
Inter-ensaio: CV<10>
Uso pretendido
Este jogo do sanduíche é para a detecção quantitativa exata de Isomerase de Triosephosphate do ser humano (igualmente conhecido como TPI1) no soro, plasma, supernates da cultura celular, lysates da pilha, homogenates do tecido.
Princípio do ensaio
Este jogo do teste do elisa é um ensaio Enzima-ligado da imunoabsorção (ELISA). A placa foi pré-revestida com o anticorpo TPI1 humano. TPI1 apresentam na amostra são adicionados e ligam aos anticorpos revestidos nos poços. E o anticorpo TPI1 humano então biotinylated é adicionado e liga a TPI1 na amostra. Então Streptavidin-HRP é adicionado e liga ao anticorpo de Biotinylated TPI1. Após a incubação Streptavidin-HRP desatado é lavado afastado durante uma etapa de lavagem. A solução da carcaça é adicionada então e a cor torna-se em proporção à quantidade de TPI1 humano. A reação é terminada pela adição de ácido para a solução e a absorvência é medida em 450 nanômetro.
Procedimento de ensaio
1. Prepare todos os reagentes, soluções padrão e amostras como instruídas. Traga todos os reagentes à temperatura ambiente antes de usar. O ensaio é executado na temperatura ambiente.
2. Determine o número de tiras exigidas para o ensaio. Introduza as tiras nos quadros para o uso. As tiras não utilizadas devem ser armazenadas em 2-8°C.
3. Adicione o padrão 50μl ao padrão bem. Nota: Não adicione o anticorpo ao padrão bem porque a solução padrão contém o anticorpo biotinylated.
4. Adicione a amostra 40μl aos poços da amostra e então adicione o anticorpo de 10μl anti-TPI1 aos poços da amostra, a seguir adicione o streptavidin-HRP 50μl aos poços da amostra e aos poços padrão (poço do controle não vazio). Misture bem. Cubra a placa com um aferidor. Incube 60 minutos em 37°C.
5. Remova o aferidor e lave a placa 5 vezes com amortecedor da lavagem. Embeba poços com pelo menos o amortecedor da lavagem de 0,35 ml para 30 segundos a 1 minuto para cada Washington. Para a lavagem automatizada, aspire todos os poços e lave 5 vezes com o amortecedor da lavagem, enchendo em demasia jorra com amortecedor da lavagem. Borre a placa nas toalhas de papel ou no outro material absorvente.
6. Adicione a solução A da carcaça 50μl a cada um poço e adicione então a solução B da carcaça 50μl a cada um bem. Incube a placa coberta com um aferidor novo por 10 minutos em 37°C na obscuridade.
7. Adicione 50μl param a solução a cada um bem, a cor azul mudará no amarelo imediatamente.
8. Determine a densidade ótica (valor do OD) de cada um poço que usa imediatamente um grupo do leitor do microplate a 450 nanômetro dentro de 10 minuetos após ter adicionado a solução da parada.
Cálculo de resultado
Construa uma curva padrão traçando o OD médio para cada padrão no vertical (Y) linha central contra a concentração no horizontal (X) a linha central e tira uma melhor curva do ajuste através dos pontos no gráfico. Estes cálculos podem melhor ser executados com o software por computador do curva-encaixe e a melhor linha do ajuste pode ser determinada pela análise de regressão.